CSE过表达保护低氧/无血清诱导骨髓间充质干细胞凋亡的机制
发布时间：2021-08-18 01:37
目的探讨胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）过表达保护低氧/无血清（H/SD）诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）凋亡的机制。方法体外分离培养大鼠MSCs,利用H/SD诱导MSCs凋亡,构建CSE基因的慢病毒表达载体p LV-Zs Green-CSE lentivirus及空载体p LV-Zs Green lentivus并感染MCSs（分别记为CSEMSCs、GFPMSCs）。设立正常培养的MSCs（NormMSCs组）、CSEMSCs组、GFPMSCs组,PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测CSE、Bcl-2、Bax及细胞色素c（Cyt c）蛋白的表达。结果与NormMSCs组及GFPMSCs组相比,CSE MSCs组CSE蛋白表达显著增高（P<0.01）,在H/SD 12 h状态下,CSEMSCs组凋亡率显著降低（P<0.01）,CSEMSCs组Bcl-2蛋白表达水平显著高于GFPMSCs组及NormMSCs组（P<0.01）,CSEMSCs组Bax蛋白表达水平显著低于GFPMSCs组及NormMSCs组（P<0.01）;CSEMSCs组线...
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2017,52(01)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
大鼠MSCs的形态×10A:原代MSCs(P0);B:第3代MSCs(P3)
图1大鼠MSCs的形态×10A:原代MSCs(P0);B:第3代MSCs(P3)2．3CSE过表达对H/SD诱导MSCs凋亡的影响流式细胞仪检测结果显示:与GFPMSCs组及NormMSCs组相比，在H/SD12h状态下，CSEMSCs组凋亡率显著降低(F=159.964，P＜0.01)，GFPMSCs组与NormMSCs组比较差异无统计学意义。见图3。2．4CSE过表达对H/SD作用下MSCsBcl-2、Bax及Cytc蛋白表达的影响在H/SD12h状态下，CSEMSCs组Bcl-2蛋白表达水平显著高于GFPMSCs组及NormMSCs组(F=11.309，P＜0.01)，CSEMSCs组Bax蛋白表达水平显著低于GFPMSCs组及NormMSCs组(F=79.420，P＜0.01);CSEMSCs组线粒体Cytc［Cytc(mito)］蛋白表达水平显著高于GFPMSCs组及NormMSCs组(F=40.550，P＜0.01)，CSEMSCs组胞质Cytc［Cytc(cyto)］蛋白表达水平显著低于GFPMSCs组及NormMSCs组(F=14.954，P＜0.01)。NormMSCs与GFPMSCs组上述指标比较，差异均无统计学意义。见图4。图2CSE转染MSCs后各组CSE蛋白表达水平A:Westernblot检测过表达CSE后MSCs中CSE蛋白表达;B:QuantityOne软件对A图条带进行灰度值分析;与NormMSCs组及GFPMSCs比较:＊＊P＜0.013讨论细胞凋亡是一种特殊形式的程序性细胞死亡。已有研究［5］表明，体外模拟心肌缺血微环境即H/SD可通过线粒体凋亡途径而非死亡受体途径诱导图3CSE过表达对H/SD诱导MSCs凋亡的影响A:流式细胞仪PI染色法检测MSCs凋亡;B:对A图条带进行量化分析;与NormMSCs及GFPMSCs比较:＊＊P＜0.01安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Jan;52(1)·39·
图4CSE过表达对H/SD作用下MSCsCytc、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响A:Westernblot检测过表达CSE后MSCs中Bcl-2、Bax及Cytc蛋白表达;B:QuantityOne软件对A图条带进行灰度值分析;与NormMSCs及GFPMSCs比较:＊＊P＜0.01MSCs凋亡。本研究首先建立H/SD诱导MSCs凋亡模型，结果显示，与对照组相比，MSCs凋亡率显著增高，表明H/SD能够诱导MSCs凋亡，这与既往研究［11］结果相一致。而CSEMSCs组细胞凋亡率显著低于GFPMSCs组及NormMSCs组，提示CSE过表达保护H/SD诱导MSCs凋亡。Cytc从线粒体向细胞质中释放被推测是细胞凋亡过程中线粒体主要事件之一，正常情况下，Cytc位于线粒体膜间隙，呈电稳定性地结合于线粒体内膜，当细胞收到凋亡刺激时，线粒体膜通透性发生改变，Cytc从细胞间隙进入胞质，释放入胞质的Cytc最终引起凋亡蛋白酶caspase的级联反应，导致细胞凋亡［12］。本研究结果显示，在H/SD12h状态下，CSEMSCs组Cytc(mi-to)蛋白表达水平显著高于GFPMSCs组及NormMSCs组，而CSEMSCs组Cytc(cyto)蛋白表达水平显著低于GFPMSCs组及NormMSCs组，GFPMSCs组与NormMSCs组比较差异无统计学意义，表明CSE过表达能明显抑制H/SD诱导MSCsCytc从线粒体向细胞质中释放。在细胞凋亡分子生物学的研究［13］中显示，Bc1-2基因家族蛋白是线粒体凋亡途径主要调节因子之一，其中促凋亡蛋白包括Bax、Bak和Bid等(Bax组蛋白)，抑凋亡蛋白包括Bcl-2、Bc1-x等(Bc1-2组蛋白)，两者的平衡在决定细胞的生存中起着重要作用。Bcl-2能和Bax形成二聚体阻止Bax插入线粒体外膜，保护线粒体电位，调节细胞内Ca2+的自稳状态和氧化还原状态来抑制凋亡［14］。Bax在线粒体及胞质之间来回穿梭，一旦?
本文编号：3348927
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2017,52(01)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
大鼠MSCs的形态×10A:原代MSCs(P0);B:第3代MSCs(P3)
图1大鼠MSCs的形态×10A:原代MSCs(P0);B:第3代MSCs(P3)2．3CSE过表达对H/SD诱导MSCs凋亡的影响流式细胞仪检测结果显示:与GFPMSCs组及NormMSCs组相比，在H/SD12h状态下，CSEMSCs组凋亡率显著降低(F=159.964，P＜0.01)，GFPMSCs组与NormMSCs组比较差异无统计学意义。见图3。2．4CSE过表达对H/SD作用下MSCsBcl-2、Bax及Cytc蛋白表达的影响在H/SD12h状态下，CSEMSCs组Bcl-2蛋白表达水平显著高于GFPMSCs组及NormMSCs组(F=11.309，P＜0.01)，CSEMSCs组Bax蛋白表达水平显著低于GFPMSCs组及NormMSCs组(F=79.420，P＜0.01);CSEMSCs组线粒体Cytc［Cytc(mito)］蛋白表达水平显著高于GFPMSCs组及NormMSCs组(F=40.550，P＜0.01)，CSEMSCs组胞质Cytc［Cytc(cyto)］蛋白表达水平显著低于GFPMSCs组及NormMSCs组(F=14.954，P＜0.01)。NormMSCs与GFPMSCs组上述指标比较，差异均无统计学意义。见图4。图2CSE转染MSCs后各组CSE蛋白表达水平A:Westernblot检测过表达CSE后MSCs中CSE蛋白表达;B:QuantityOne软件对A图条带进行灰度值分析;与NormMSCs组及GFPMSCs比较:＊＊P＜0.013讨论细胞凋亡是一种特殊形式的程序性细胞死亡。已有研究［5］表明，体外模拟心肌缺血微环境即H/SD可通过线粒体凋亡途径而非死亡受体途径诱导图3CSE过表达对H/SD诱导MSCs凋亡的影响A:流式细胞仪PI染色法检测MSCs凋亡;B:对A图条带进行量化分析;与NormMSCs及GFPMSCs比较:＊＊P＜0.01安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Jan;52(1)·39·
图4CSE过表达对H/SD作用下MSCsCytc、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响A:Westernblot检测过表达CSE后MSCs中Bcl-2、Bax及Cytc蛋白表达;B:QuantityOne软件对A图条带进行灰度值分析;与NormMSCs及GFPMSCs比较:＊＊P＜0.01MSCs凋亡。本研究首先建立H/SD诱导MSCs凋亡模型，结果显示，与对照组相比，MSCs凋亡率显著增高，表明H/SD能够诱导MSCs凋亡，这与既往研究［11］结果相一致。而CSEMSCs组细胞凋亡率显著低于GFPMSCs组及NormMSCs组，提示CSE过表达保护H/SD诱导MSCs凋亡。Cytc从线粒体向细胞质中释放被推测是细胞凋亡过程中线粒体主要事件之一，正常情况下，Cytc位于线粒体膜间隙，呈电稳定性地结合于线粒体内膜，当细胞收到凋亡刺激时，线粒体膜通透性发生改变，Cytc从细胞间隙进入胞质，释放入胞质的Cytc最终引起凋亡蛋白酶caspase的级联反应，导致细胞凋亡［12］。本研究结果显示，在H/SD12h状态下，CSEMSCs组Cytc(mi-to)蛋白表达水平显著高于GFPMSCs组及NormMSCs组，而CSEMSCs组Cytc(cyto)蛋白表达水平显著低于GFPMSCs组及NormMSCs组，GFPMSCs组与NormMSCs组比较差异无统计学意义，表明CSE过表达能明显抑制H/SD诱导MSCsCytc从线粒体向细胞质中释放。在细胞凋亡分子生物学的研究［13］中显示，Bc1-2基因家族蛋白是线粒体凋亡途径主要调节因子之一，其中促凋亡蛋白包括Bax、Bak和Bid等(Bax组蛋白)，抑凋亡蛋白包括Bcl-2、Bc1-x等(Bc1-2组蛋白)，两者的平衡在决定细胞的生存中起着重要作用。Bcl-2能和Bax形成二聚体阻止Bax插入线粒体外膜，保护线粒体电位，调节细胞内Ca2+的自稳状态和氧化还原状态来抑制凋亡［14］。Bax在线粒体及胞质之间来回穿梭，一旦?
本文编号：3348927
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