雌激素激活PI3K-Akt通路抑制血管内皮细胞内质网应激凋亡

发布时间：2017-04-29 17:10

  本文关键词：雌激素激活PI3K-Akt通路抑制血管内皮细胞内质网应激凋亡，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究的目的是明确雌激素对内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)及过度的ERS诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)凋亡的抑制作用,并进一步研究其抑制作用的分子机制,以探讨雌激素对心血管的保护机制。方法:1 10μmol/l的衣霉素(Tunicamycin,TM)诱导HUVEC10小时或2mmol/l的二硫苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)诱导8小时,以构建ERS模型。通过检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)的表达,判断是否构建成功。提前给予10~(-8)mol/l的17-β雌二醇(17β-estradiol,E_2)预处理1小时,量化分析GRP78的变化,以探索E_2对ERS的作用。2分别用TM/DTT诱导HUVEC 6小时,Western blot检测ERS的三条主要信号通路蛋白,包括蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、转录激活因子-6(activating transcription factor 6,ATF6)及需肌醇酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)通路蛋白的变化,以探索ERS最主要的信号通路,并进一步明确雌激素的抑制作用。3分别用TM/DTT诱导HUVEC10小时/8小时,Western blot检测ERS凋亡标志蛋白——C/EBP-同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的变化。TM/DTT诱导HUVEC 12小时,用Hochest染色检测细胞的凋亡率,探索E_2对ERS凋亡的抑制作用。4分别添加10-7mol/l特异性E_2受体拮抗剂ICI182,780和G15,检测磷酸化的PERK/PERK(p-PERK/PERK)的表达,探索雌激素受体在其抑制ERS中的作用。5分别添加10-5mol/l信号通路阻断剂,包括LY294002、SB203580、SP600125和U0126,检测p-PERK/PERK的表达,探索雌激素抑制ERS的过程中激活的最主要的受体后信号通路。结果:1 TM(10小时)/DTT(8小时)诱导的HUVEC ERS组GRP78的表达量显著上调,而10~(-8)mol/l的E_2可显著抑制其上调;2 TM(6小时)/DTT(6小时)诱导的HUVEC ERS组,三条信号通路蛋白表达均明显上调,其中PERK信号通路的蛋白上调最显著,而10~(-8)mol/l的E_2可显著抑制其上调;3 TM(10小时)/DTT(8小时)诱导的HUVEC ERS组,CHOP的表达量显著上调,且TM(12小时)/DTT(12小时)诱导组细胞ERS凋亡率显著增加,而10~(-8)mol/l E_2的预处理使上调明显回复,凋亡细胞减少;4 E_2有显著抑制p-PERK/PERK上调的作用,而E_2的保护作用可分别被ICI182,780和G15阻断,同时添加ICI182,780和G15时阻断作用最显著;5 LY294002、SB203580、SP600125和U0126均可减弱E_2抑制p-PERK/PERK上调的作用。LY294002——磷脂酰肌醇-3羟基激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)的阻断剂的作用最显著,而其本身对p-PERK/PERK的表达无显著影响。结论:1雌激素可以通过抑制PERK通路引起的ERS凋亡,保护血管内皮细胞,以达到防止动脉粥样硬化,保护心血管系统的作用。2雌激素抑制ERS的机制主要是通过活化的雌激素受体激活PI3K-Akt信号通路实现的。
【关键词】：内质网应激 细胞凋亡 雌激素受体后信号通路 动脉粥样硬化 人脐静脉内皮细胞
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54;R711.75
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文缩写8-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-17
• 结果17-19
• 附图19-26
• 讨论26-29
• 结论29-30
• 参考文献30-34
• 综述 雌激素防止动脉粥样硬化的机制探讨34-44
• 参考文献40-44
• 致谢44-45
• 个人简介45

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本文编号：335280