新奇型蛋白激酶C在低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用和机制研究

发布时间：2021-08-28 07:22

　　第一部分:磁性分离法分离培养小鼠肺动脉平滑肌细胞目的:通过磁性分离法分离小鼠原代肺动脉平滑肌细胞,提高细胞分离的成功率,为体外培养原代肺动脉平滑肌细胞并构建低氧模型打下良好的实验基础,同时对小鼠原代肺动脉平滑肌细胞的分离方法提出新思路和新参考。方法:1.选取体重20g左右的健康成年C57BL/6J小鼠,在无菌条件下采用腹腔注射4%水合氯醛（0.01ml/g）对小鼠进行麻醉。2.麻醉后,解剖小鼠使其暴露肾脏并切断肾动脉除血,之后暴露胸腔,自右室向肺动脉方向缓慢注入灭菌的PBS液3-5ml,直到肺变白,用钝性分离器分离暴露气管。3.向肺右室内缓慢注入PA agarose 3-5ml,直到肺变成灰色。将Lung agarose 2-3ml注入气管内,直到凝胶充满肺组织。取走心肺,置入冰冷PBS液约5分钟,使凝胶凝固。4.弃掉肺动脉主干及左右肺动脉分支,切碎肺组织,移入50ml灭菌离心管中,连接磁铁,此时含铁组织会移至靠近磁铁的离心管管壁上,吸出PBS液,用灭菌的PBS液5ml清洗肺组织3次。5.向离心管中加入6ml胶原酶溶液,倒入培养皿,37℃消化1小时。1小时后,用20ml注射器反复抽吸肺... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

小鼠的麻醉与解剖

图 2-2-1 免疫荧光鉴定肺动脉平滑肌细胞（×600）。A.蓝色为细胞核，B.绿色荧in 表达阳性，C.红色荧光表示 smooth muscle myosin heavy chain 阳性，D 为 A图的叠加。3 讨 论脉平滑肌细胞体外培养已经广泛应用于肺血管疾病等方面的研究，压发生发展机制的重要手段。Davies P[34]曾报道低氧 5 天引起大鼠滑肌细胞病理性肥大，而此时直径大于 100 m 的肺动脉平滑肌还没此，肺小动脉的平滑肌细胞与肺大动脉的平滑肌细胞生物学特性是不小动脉平滑肌细胞是肺动脉高压发生发展的关键因素[35]，所以能远端的肺小动脉组织，对实验的意义将会更大。肺小动脉平滑肌细可以说是众多肺动脉高压疾病研究的基础，关系到实验模型的建立

CCK-8 检测不同低氧处理时间下肺动脉平滑肌细胞增，Mean±SD，n=6，*P>0.05 vs Normoxia 24h，#P>0.05 vs Normoxia 48h，aP<0.05 vs Normoxia 72h。

【参考文献】：
期刊论文
[1]低氧性肺动脉高压发病机制研究进展[J]. 丁兴,孙莉,王苒.  临床肺科杂志. 2017(07)
[2]CTRP9抑制低氧环境下肺微血管内皮细胞IL-6和TNF-α表达的研究[J]. 金巧艳,曾明华,谭延振,苏慧,易蔚,张海锋,孙新.  心脏杂志. 2017(04)
[3]HIF-1α和HIF-2α在低氧性肺动脉高压中的不同作用研究进展[J]. 邓鋆,张旭,喻珊珊.  中国药理学通报. 2017(01)
[4]热休克蛋白70对新生大鼠缺氧性肺动脉高压的保护作用[J]. 王乐,吴海燕,李明霞.  中国当代儿科杂志. 2017(01)
[5]酶消化法分离培养原代肺动脉平滑肌细胞及免疫组化鉴定[J]. 王爱平,李严兵,谢巍,曹宇辉,彭田红,周小兵,龚邵新.  中南医学科学杂志. 2015(01)
[6]肺动脉高压临床最新分类介绍[J]. 何玉虎,陆晓兰,朱茜,吕安康.  诊断学理论与实践. 2014(02)
[7]HIF-1α、ET-1和iNOS在新生儿缺氧性肺动脉高压发病中的作用[J]. 王莉,朱艳萍,李明霞.  中国当代儿科杂志. 2011(01)
[8]阿托伐他汀抑制RhoA/Rho激酶活性逆转低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉高压和肺血管重构[J]. 代丽,吴尚洁.  中南大学学报(医学版). 2011(01)
[9]大鼠细小肺动脉平滑肌细胞原代培养和鉴定方法的研究[J]. 钱国清,王良兴,陈婵,黄晓颖,叶舒婷.  中国应用生理学杂志. 2010(01)

博士论文
[1]伐地那非通过改善氧化应激水平治疗肺动脉高压的临床与基础研究[D]. 范右飞.山东大学 2014



本文编号：3368075