氧化应激条件下自噬及PARP-1在血管平滑肌细胞中的作用及其关系的研究

发布时间：2021-09-04 02:23

　　目的:动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是一类严重危害人类健康的疾病,氧化应激在其发生发展中发挥了重要作用^[1]。目前研究发现自噬与AS密切相关,参与并调控AS的发生发展进程。越来越多证据表明各种致动脉粥样硬化因素产生的活性氧（reactive oxygen species,ROS）作为诱导自噬的信号分子,在自噬的形成过程中起着重要作用^[2]。自噬是一把“双刃剑”,一方面自噬可以在氧化应激等不利条件下保护细胞;另一方面如果保护机制失败,就会启动死亡程序导致细胞死亡。既往一些研究证实氧化脂质诱导的自噬对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）发挥保护作用。然而最新的一项研究发现自噬基因敲除VSMCs抗氧化应激能力明显增加,细胞死亡减少^[3]。目前自噬在氧化应激中的确切机制尚未阐明。深入研究自噬的调控机制对AS的防治以及阻止AS的继发病变具有重要意义。多聚ADP核糖聚合酶-1（Poly（ADP-ribose）polymerase-1,PARP-1）是一种广泛存在... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

原代培养的VSMCs免疫荧光鉴定结果(×400倍)

原代培养的 VSMCs 免疫荧光鉴定结果(×400 倍)3.2 H2O2 对血管平滑肌细胞生存率的影响H2O2 被广泛应用于体外细胞氧化应激模型的建立。我们观察不同浓度 H2O2和不同作用时间条件下 VSMCs 生存率的变化。首先我们用不同浓度的 H2O2 处理小鼠血管平滑肌细胞 16 h，空白组作为对照。结果显示 H2O2 呈浓度依赖性的降低 VSMCs 活力（图 3A）。我们采用 0.1 mmol/L H2O2 作用 VSMCs 不同时间后，结果显示 VSMCs 活性表现为时间依赖性降低，在 16 小时作用效果最明显，在 24 小时活力较前略有恢复（图 3B）。A B

中国医科大学博士学位论文LC3 是目前公认的自噬分子标记物。自噬过程中泛素样体系对定位于胞浆的LC3-I 进行修饰加工，并产生定位于自噬小体的 LC3-II。LC3-II 的含量与自噬的程度成正比。Beclin-1 也是调节自噬的主要分子，参与自噬体形成的多个环节。我们利用 Western-blot 检测 LC3-II 和 Beclin-1 蛋白的表达以评估自噬水平。我们检测 H2O2 处理 VSMCs 后不同时间点自噬标志蛋白的变化情况。观察指标为 LC3-II/LC3-I 比值和 Beclin-1。如图 4 所示：与对照组比较，LC3-II/LC3I比值随时间逐渐增加。我们进一步检测了 Beclin-1 的表达水平，亦表现为随时间增加的趋势。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of AMPK in atherosclerosis via autophagy regulation[J]. Hanxiao Ou,Chuhao Liu,Wenjie Feng,Xinwen Xiao,Shengsong Tang,Zhongcheng Mo.  Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[2]PARP-1抑制对PM2.5致人支气管上皮细胞炎症反应的保护作用[J]. 黄庆,张晶晶,张遵真.  四川大学学报(医学版). 2016(06)
[3]Inflammation, oxidative stress and renin angiotensin system in atherosclerosis[J]. Kazim Husain,Wilfredo Hernandez,Rais A Ansari,Leon Ferder.  World Journal of Biological Chemistry. 2015(03)



本文编号：3382363