USP22在血管钙化中的作用及其机制的探究

发布时间：2021-09-04 15:55

　　目的:探究USP22对人主动脉血管平滑肌细胞成骨分化及钙化的作用以及其相关机制。研究方法:用β-磷酸甘油建立钙化模型,并用茜素红染色及Western Blot实验验证模型是否成功。用钙定量检测的方法确认雌激素及其受体对高磷诱导的人主动脉血管平滑肌细胞（HASMCs）的成骨分化及钙化的作用。用Western Blot实验及免疫荧光实验明确高磷情况下USP22的表达情况。构建FLAG-USP22质粒模型,用茜素红染色及Western Blot实验明确USP22对高磷诱导的HASMCs成骨分化及钙化的作用。用免疫荧光染色及confocal实验探究USP22和ERα的共定位,用CO-IP实验探究USP22和ERα的相互作用。用荧光素酶双报告实验及Western Blot实验探究USP22对ERα转录活性的调控作用。用CO-IP及荧光素酶双报告实验探究USP22对ERα的调控作用是否是通过HDAC1实现的。结果:高磷以剂量依赖性的方式诱导HASMCs成骨分化和钙化,雌激素以浓度依赖的方式抑制高磷对HASMCs的作用,USP22在高磷诱导的钙化HASMCs中高表达且能促进高磷诱导的HASMCs钙化... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

USP22加重β-PG诱导的HASMCs的钙化

USP22与ERα的定位将HASMCs细胞均匀铺于12孔板，第二天按照分组更换含β-PG的培养基并给予雌激素（100nM）刺激或无水乙醇对照，刺激2小时-6小时后固定细胞进行免疫荧光染色

中国医科大学硕士学位论文213.5HDAC1参与USP22对ERα转录活性的抑制作用为了探究USP22对ERα的负向调控机制，本实验引入了组蛋白去乙酰化酶HDAC。HDAC,可以使核心组织蛋白(H2A、H2BH3和H4)氨基端的赖氨酸残基脱乙酰化,可以抑制Hela细胞中ERα的转录调控（28847748）。首先，用免疫共沉淀实验检测USP22与HDAC1的相互作用，研究结果表明，无论有没有β-PG的存在无论有没有雌激素的刺激，HDAC1都可以与USP22共沉淀（图3.5A-B）。随后本实验用荧光素酶双报告实验明确USP22对ERα的下调是否有HDAC的参与。此处使用了HDAC的抑制剂TSA,实验结果发现USP22能够抑制ERα的转录活性，这与之前的实验结果相符；TSA可以上调ERα的转录活性，而且TSA能够逆转USP22对ERα转录活性的抑制作用（图3.5C）。WesternBlot检测FLAG的表达来证明双报告实验的转染效率（图3.5D）。这些结果表明，USP22对ERα转录活性的抑制作用有HDAC1的参与，抑制HDAC可以逆转USP22对ERα的抑制作用。图3.5USP22通过HDAC1抑制ERα的转录活性A：将HASMCs分别给予含β-PG的培养基或普通培养基培养5天，用USP22抗体或IgG抗体


本文编号：3383561