黄芩素抑制心肌细胞程序性坏死及心肌梗死的分子机制研究

发布时间：2021-10-17 03:21

　　目的据报道,心肌细胞坏死是心肌梗塞,缺血/再灌注和心力衰竭等心脏病的主要发病机理,故心肌坏死是预防和治疗心脏病的重要治疗靶点。Hsc70羧基末端反应蛋白（CHIP）可以通过其E3泛素连接酶功能发挥保护作用,但CHIP是否能够抑制氧化应激诱导的心肌坏死鲜有报道。黄芩素能够通过抑制心肌细胞氧化应激和凋亡来发挥心脏保护作用,但黄芩素是否能够通过抑制心肌坏死来发挥保护作用至今未有报道。本研究旨在探究黄芩素是否能够通过抑制坏死来发挥心肌保护作用,以及该作用是否是通过稳定CHIP对RIPK1和RIPK3的降解来抑制心肌坏死的发生。方法使用PI染色、TUNEL染色以及LDH释放量检测的方法,检测黄芩素在细胞水平上对过氧化氢引起心肌损伤的保护作用。通过western blot、qPCR、免疫共沉淀的方法验证RIPK1/RIPK3在过氧化氢诱导的心肌坏死中发挥重要作用。同时,使用RIPK1/RIPK3的siRNA进一步证明它们是坏死发生的重要相关蛋白。采用western blot和免疫共沉淀的方法探究黄芩素是否能够通过抑制RIPK1/RIPK3坏死复合物的形成而抑制心肌坏死的发生。使用western b... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
材料和方法
    1. 实验细胞与动物
    2. 实验仪器与设备
    3. 实验耗材与试剂
    4. 实验方法
        4.1 细胞培养
        4.2 心肌缺血再灌注小鼠模型构建
        4.3 细胞死亡检测
        4.4 乳酸脱氢酶释放测定
        4.5 蛋白免疫印记
        4.6 实时定量PCR
        4.7 免疫共沉淀
        4.8 RNA干扰
        4.9 同源建模与分子对接
        4.10 心脏组织的PI和TUNEL染色
    5. 统计分析
结果
    1. 黄芩素可减轻体外H_2O_2诱导的心肌坏死
    2. RIPK1/RIPK3参与调控H_2O_2诱导的心肌坏死
    3. 黄芩素通过干扰RIPK1/RIPK3坏死小体的形成来抑制坏死的发生
    4. CHIP通过泛素依赖性降解途径降解RIPK1和RIPK3来抑制心肌坏死
    5. 黄芩素通过稳定CHIP减弱H_2O_2诱导的坏死
    6. 黄芩素与CHIP的分子对接分析
    7. 黄芩素能够减轻小鼠体内心肌损伤
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢



本文编号：3441014