GDF11在C57BL-6小鼠动脉钙化中的作用及其机制研究

发布时间：2021-10-21 19:32

　　目的探究予以外源性鼠源r-GDF11及AAV转染主动脉下调GDF11表达对C57BL-6小鼠动脉血管钙化进程的影响;探究GDF11是否通过Smad2/3信号通路影响C57BL-6小鼠动脉钙化。方法1.C57BL-6小鼠动脉钙化模型的建立:实验采用12周龄C57BL-6雄性小鼠,适应性饲养1周后,予以维生素D3（Vit D3）·无水乙醇溶液肌注、尼古丁·花生油悬浊液灌胃,分别饲养3、5、7、9周,通过Von Kossa-苏木素-伊红染色观察并比较4组中主动脉弹性纤维断裂情况、血管内膜及中膜钙化程度,免疫组化观察钙化标志蛋白BMP2、RUNX2分布情况,从而建立起成熟、稳定的时长依赖的C57BL-6小鼠钙化梯度模型。2.腹腔注射外源性鼠源r-GDF11,观察上调GDF11对C57BL-6小鼠动脉血管钙化进程的影响:取5周龄C57BL-6小鼠30只,随机均分成5组,适应性饲养1周后,分别每天予以腹腔注射生理盐水、溶媒缓冲液、低浓度外源重组小鼠源GDF11（r-GDF11）,中浓度r-GDF11,高浓度r-GDF11,预处理7周,之后诱导钙化7周,眼球采血后分离其主动脉,观察并比较5组之间Vo... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

五组小鼠主动脉切片并VonKossa·HE染色

30图1五组小鼠主动脉切片并VonKossa·HE染色。横切×100，纵切×50Fig1.VKstainingofaortasectionsinfivegroupsofmice.Transect×100,Rip×50.2.1.2免疫组化观察小鼠主动脉钙化标志蛋白BMP2、RUNX2及GDF11的分布免疫组化中，空白组及3周组未见明显钙化标志蛋白BMP2及RUNX2分布，提示几乎无钙化；5周组已可见少量棕黄色BMP2及RUNX2分布于动脉内膜及中膜区域，提示钙化有所加重；7周组及9周组可见大量棕黄色BMP2及RUNX2分布于动脉内膜及中膜中，提示钙化程度严重。（见图2）图2五组小鼠主动脉钙化标志蛋白BMP2及RUNX2免疫组化×50Fig2.ImmumohistochemicaltodetectBMP2andRUNX2ofaortasectionsinfivegroupsofmice.×50

312.2予以C57BL-6小鼠不同浓度外源性r-GDF11后诱导钙化2.2.1VonKossa·HE染色观察小鼠主动脉钙化程度对五组C57BL-6小鼠不同浓度r-GDF11腹腔注射7周后诱导钙化，解剖后将动脉血管VonKossa·HE染色，可见空白组及溶媒组动脉内膜及中膜大量黑褐色钙盐沉积，内膜欠光滑，中膜弹力纤维断裂明显，无连续性；低浓度组内膜及中膜仍可见黑褐色钙盐沉积，但中膜弹力纤维较为完整；中浓度及高浓度组内膜及中膜几乎未见黑褐色钙盐沉积，内膜光滑，中膜弹力纤维完整，连续。该结果提示：r-GDF11浓度越高，小鼠诱导钙化后动脉钙化程度越轻（见图3）图3五组小鼠主动脉切片并VonKossa·HE染色。横切×100，纵切×50Fig3.VKstainingofaortasectionsinfivegroupsofmice.Transect×100,Rip×50.2.2.2免疫组化观察小鼠主动脉钙化标志蛋白BMP2、RUNX2及GDF11的分布对五组C57BL-6小鼠主动脉行免疫组化检测GDF11蛋白，在空白组及溶媒组中，黄褐色GDF11表达较为明显，且分布于内膜与中膜内；在低浓度组中，黄褐色GDF11表达较空白组及溶媒组增多，内膜及中膜均有所分布；在中浓度组及高浓度组中，黄褐色GDF11大量表达，遍布于主动脉整个组织中。免疫组化检测钙化标志蛋白BMP2及RUNX2，在空白组及溶媒组中，可见黄褐色钙化标志蛋白BMP2及RUNX2表达明显，遍布于主动脉内膜与中膜；在低浓度组中，钙化标志蛋白BMP2

【参考文献】：
期刊论文
[1]生长分化因子11对衰老和疾病作用的研究进展[J]. 李泽环,江颖.  老年医学与保健. 2019(01)
[2]不同年龄对维生素D3和尼古丁诱导大鼠血管钙化的影响[J]. 史祎,周业波,蔡嫣,滕旭,宋君秋,段晓辉,张炜真,齐永芬.  北京大学学报(医学版). 2010(02)



本文编号：3449591