成年小鼠心脏成纤维细胞的分离、纯化和原代培养

发布时间：2021-11-08 02:35

　　目的探讨并建立成年小鼠心脏成纤维细胞原代培养方法。方法采用0.8 g/LⅣ型胶原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶为消化液,以多次短时间水浴振荡的方式消化成年小鼠心脏组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞。波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞类型及纯度;倒置相差显微镜观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;CCK-8法测定细胞增殖能力、Western blot法检测转化生长因子β1（TGF-β1）刺激后细胞SMAD家族成员2/3（Smad2/3）蛋白及磷酸化水平。结果差速贴壁后在相差显微镜下可见大量球形贴壁细胞;3 d后细胞逐渐由圆形伸展为长梭形并迅速增殖,分裂象多见;5 d后细胞数量显著增多,完全汇合无空隙;细胞生长曲线近似"S"形。波形蛋白阳性率可达95%。CCK-8法显示在第3⁵天细胞增殖能力最显著,给予第2代心脏成纤维细胞TGF-β1刺激显示Smad2/3蛋白磷酸化水平明显增加。结论建立了一种快速、经济、有效获取成年小鼠心脏成纤维细胞的方法。 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2017,33(01)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 取材
        1.2.2 组织细胞分离培养
        1.2.3 细胞传代
        1.2.4 免疫荧光细胞化学染色法鉴定心脏成纤维细胞
        1.2.5 细胞生长曲线测定
        1.2.6 CCK-8法测定细胞增殖情况
        1.2.7 Western blot法检测TGF-β1刺激后心脏成纤维细胞Smad2/3和p-Smad2/3的表达
        1.2.8 统计学分析
2 结果
    2.1 心脏成纤维细胞的生物学特性
    2.2 心脏成纤维细胞生长曲线及增殖活力
    2.3 心脏成纤维细胞纯度鉴定
    2.4 TGF-β1刺激心脏成纤维细胞后导致Smad3磷酸化
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3482833