诱导多能干细胞来源的外泌体在体外心肌细胞损伤中的作用及miRNA组学分析
发布时间：2021-11-12 19:52
[目的]急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）是由于急性持续性冠状动脉缺血缺氧引起的心肌坏死,最终导致心肌重构及难以逆转的心功能下降。目前,对于心肌梗死的治疗方法主要包括药物、溶栓治疗、介入及手术治疗等,但这些措施不能从根本上解决心肌修复的问题,因此再生和修复疗法对于心肌梗死起着至关重要的作用。而目前,干细胞疗法被认为是治疗心肌梗死具有前景的方法,同时,基于干细胞的旁分泌功能,目前干细胞来源的外泌体在急性心肌损伤中的修复作用成为了研究的热点。诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cell,iPSC）是利用重编程技术将重编程因子转入成体细胞得到的具有与胚胎干细胞相似的全能性的一类干细胞,基于其来源广泛,同时可以排除免疫排斥及伦理等问题,其在修复损伤组织和器官的治疗中具有广泛的应用前景,但基于其细胞治疗中仍然面临着致瘤性的影响。在外泌体的研究中,基于诱导多能干细胞与胚胎干细胞的相似性,目前有研究已经发现诱导多能干细胞来源的外泌体（induced pluripotent stem cells derived exosome,...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１Ａ．外泌体透射电镜观察ａ．ＨＦＦ＿Ｅｘｏ在透射电镜下的形态ｂ．ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ在透射电镜下的形??
Ｄ??Ｏｈ?＇?６ｈ??１２ｈ?２４ｈ??图３．不同浓度Ｈ２０２干预不同时间对Ｈ９Ｃ２细胞存活率的影响Ａ．不同浓度Ｈ２０２干预６ｈ??后Ｈ９Ｃ２细胞存活率；Ｂ．不同浓度Ｈ２０２干预１２ｈ后Ｈ９Ｃ２细胞存活率；Ｃ．不同浓度Ｈ２０２??干预２４ｈ后Ｈ９Ｃ２细胞存活率；Ｄ．用２００?ｕ?ｍｏｌ／Ｌ作用Ｈ９Ｃ２细胞Ｏｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ后观察??细胞凋亡情况。柱状图分析用不同浓度Ｈ２０２千预Ｈ９Ｃ２后，采用配对ｔ检验分析，其中??＊＊Ｐ＜０．０１，＂＊Ｐ＜０．００１。??４．ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ及ＨＦＦ－Ｅｘｏ对心肌损伤的治疗效果。??４．１?ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ及ＨＦＦ－Ｅｘｏ对受损的Ｈ９Ｃ２细胞存活率的影响??向２００?ｕｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２０２干预１２小时的Ｈ９Ｃ２细胞中分别加入２〇ｈＬＰＢＳ、??ＨＦＦ－Ｅｘｏ、ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ（约３Ｘ丨〇７？１〇８个囊泡）共培养２４ｈ后，加入ＣＣＫ８工作液，??在酶联免疫检测仪上４５０ｎｍ处测定吸光度，结果显示加入ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ、ＨＦＦ－Ｅｘｏ??后各组细胞存活率较ＰＢＳ组均上升，ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ效果更为显著，统计学差异有显??著性意义（Ｐ＜〇．〇５）（图４）。??２４??
ＨＦＦ－Ｅｘｏ组、ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ??组，Ｈ２０２干预１２小时后换无血清培养基，分别加入１００?ｕＬ?ＰＢＳ、ＨＦＦ－Ｅｘｏ组、??ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ组（约１．５Ｘ１０＊？１〇９小囊泡）干预２４小时后，消化提取Ｈ９Ｃ２细胞??蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测，分析结果可见ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ及ＨＦＦ－Ｅｘｏ处理组与ＰＢＳ对??照组相比，Ｃｌｅａｖｅｄ?ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达减少，但ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ效果更为显著，说明??外泌体能够减轻受损Ｈ９Ｃ２细胞凋亡，但ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ效果更为显著（图５）。??Ａ?Ｂ?ｊ??１?？??＾?１．５１?１???１??ｉ?ｊ?ｊ?１１．０－?Ａ?＇??Ｃｌｅａｖｅｄ?ｃａｓｐａｓｅ－３?ｇＨｋ?１７Ｋｄ??ｇ〇ｓ．?■??Ｐ－ａｃｔｌｎ?４６Ｋｄ??ｉ?参?ｙ??｜?务?４ｓ??图５．ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ及ＨＦＦ－Ｅｘｏ对受损Ｈ９Ｃ２细胞凋亡相关蛋白表达的影响Ａ．Ｗｅｓｔｅｍ?ｂｌｏｔ检??测Ｃａｓｐａｓｅ－３的表达水平Ｂ．采用配对ｔ检验统计分析，＊＊Ｐ＜０．０１，?＊＊＊＊?Ｐ＜０．０００１。??４．３?ＴＵＮＥＬ凋亡染色检测??向２００?Ｐ?ｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２〇２干预１２ｈ的Ｈ９Ｃ２细胞中分别加入２〇ｎＬＰＢＳ、??ＨＦＦ－Ｅｘｏ、ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ（约１．５Ｘ?１〇８？１〇９小囊泡）共培养２４ｈ后，用ＴＵＮＥＬ凋亡染色??２５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]CircRNA＿005647通过结合miR-27b-3p抑制小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达[J]. 袁淑菁,梁景南,张铭,朱杰宁,潘蓉,李晖,曾妮,温艺红,易芷瑶,单志新. 南方医科大学学报. 2019(11)
[2]Stem cell-derived exosomes as a therapeutic tool for cardiovascular disease[J]. Etsu Suzuki,Daishi Fujita,Masao Takahashi,Shigeyoshi Oba,Hiroaki Nishimatsu. World Journal of Stem Cells. 2016(09)
本文编号：3491555
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１Ａ．外泌体透射电镜观察ａ．ＨＦＦ＿Ｅｘｏ在透射电镜下的形态ｂ．ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ在透射电镜下的形??
Ｄ??Ｏｈ?＇?６ｈ??１２ｈ?２４ｈ??图３．不同浓度Ｈ２０２干预不同时间对Ｈ９Ｃ２细胞存活率的影响Ａ．不同浓度Ｈ２０２干预６ｈ??后Ｈ９Ｃ２细胞存活率；Ｂ．不同浓度Ｈ２０２干预１２ｈ后Ｈ９Ｃ２细胞存活率；Ｃ．不同浓度Ｈ２０２??干预２４ｈ后Ｈ９Ｃ２细胞存活率；Ｄ．用２００?ｕ?ｍｏｌ／Ｌ作用Ｈ９Ｃ２细胞Ｏｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ后观察??细胞凋亡情况。柱状图分析用不同浓度Ｈ２０２千预Ｈ９Ｃ２后，采用配对ｔ检验分析，其中??＊＊Ｐ＜０．０１，＂＊Ｐ＜０．００１。??４．ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ及ＨＦＦ－Ｅｘｏ对心肌损伤的治疗效果。??４．１?ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ及ＨＦＦ－Ｅｘｏ对受损的Ｈ９Ｃ２细胞存活率的影响??向２００?ｕｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２０２干预１２小时的Ｈ９Ｃ２细胞中分别加入２〇ｈＬＰＢＳ、??ＨＦＦ－Ｅｘｏ、ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ（约３Ｘ丨〇７？１〇８个囊泡）共培养２４ｈ后，加入ＣＣＫ８工作液，??在酶联免疫检测仪上４５０ｎｍ处测定吸光度，结果显示加入ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ、ＨＦＦ－Ｅｘｏ??后各组细胞存活率较ＰＢＳ组均上升，ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ效果更为显著，统计学差异有显??著性意义（Ｐ＜〇．〇５）（图４）。??２４??
ＨＦＦ－Ｅｘｏ组、ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ??组，Ｈ２０２干预１２小时后换无血清培养基，分别加入１００?ｕＬ?ＰＢＳ、ＨＦＦ－Ｅｘｏ组、??ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ组（约１．５Ｘ１０＊？１〇９小囊泡）干预２４小时后，消化提取Ｈ９Ｃ２细胞??蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测，分析结果可见ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ及ＨＦＦ－Ｅｘｏ处理组与ＰＢＳ对??照组相比，Ｃｌｅａｖｅｄ?ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达减少，但ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ效果更为显著，说明??外泌体能够减轻受损Ｈ９Ｃ２细胞凋亡，但ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ效果更为显著（图５）。??Ａ?Ｂ?ｊ??１?？??＾?１．５１?１???１??ｉ?ｊ?ｊ?１１．０－?Ａ?＇??Ｃｌｅａｖｅｄ?ｃａｓｐａｓｅ－３?ｇＨｋ?１７Ｋｄ??ｇ〇ｓ．?■??Ｐ－ａｃｔｌｎ?４６Ｋｄ??ｉ?参?ｙ??｜?务?４ｓ??图５．ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ及ＨＦＦ－Ｅｘｏ对受损Ｈ９Ｃ２细胞凋亡相关蛋白表达的影响Ａ．Ｗｅｓｔｅｍ?ｂｌｏｔ检??测Ｃａｓｐａｓｅ－３的表达水平Ｂ．采用配对ｔ检验统计分析，＊＊Ｐ＜０．０１，?＊＊＊＊?Ｐ＜０．０００１。??４．３?ＴＵＮＥＬ凋亡染色检测??向２００?Ｐ?ｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２〇２干预１２ｈ的Ｈ９Ｃ２细胞中分别加入２〇ｎＬＰＢＳ、??ＨＦＦ－Ｅｘｏ、ｉＰＳＣ－Ｅｘｏ（约１．５Ｘ?１〇８？１〇９小囊泡）共培养２４ｈ后，用ＴＵＮＥＬ凋亡染色??２５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]CircRNA＿005647通过结合miR-27b-3p抑制小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达[J]. 袁淑菁,梁景南,张铭,朱杰宁,潘蓉,李晖,曾妮,温艺红,易芷瑶,单志新. 南方医科大学学报. 2019(11)
[2]Stem cell-derived exosomes as a therapeutic tool for cardiovascular disease[J]. Etsu Suzuki,Daishi Fujita,Masao Takahashi,Shigeyoshi Oba,Hiroaki Nishimatsu. World Journal of Stem Cells. 2016(09)
本文编号：3491555
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