SPAG6基因对骨髓增生异常综合征（MDS）细胞增殖的影响及机制研究

发布时间：2021-11-19 05:09

　　目的:检测SPAG6基因在MDS或MDS-AML患者骨髓标本的表达情况,以及构建pGC-SPAG6-shRNA重组慢病毒载体靶向干预SPAG6基因表达,探索SPAG6基因表达水平下调后对骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:收集MDS或MDS-AML患者骨髓标本21例（MDS 11例,MDS-AML 10例）,非癌症患者对照骨髓标本7例。将新鲜的骨髓标本提取单个核细胞,利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测SPAG6 mRNA的相对表达量。对已上传至TCGA数据库的急性髓系白血病（AML）患者的骨髓标本SPAG6 mRNA表达分析及Kaplan-Meier生存曲线分析。实验分为3组:Blank组、NC-LV组及SPAG6-LV组。将设计好的阴性对照空载重组慢病毒载体NC-shRNA及靶基因重组慢病毒载体SPAG6-shRNA转染至对数期SKM-1细胞中,利用倒置荧光显微镜观察各组细胞的转染情况,流式细胞检测术检测细胞转染率,qRT-PCR及Western blotting法验证SPAG6基因干扰效果。利用CCK-8法检测SPAG6基因表... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SPAG6基因在MDS或MDS-AML患者骨髓细胞中表达Figure1ExpressionofSPAG6geneinbonemarrowcellsofpatientswithMDSorMDS-AML(A)DifferentialexpressionofSPAG6mRNAincancer-freepatientsandMDSorMDS-AML

图 2 TCGA 数据库已发表的 AML 患者骨髓标本 SPAG6 mRNA 表达的分析。Figure2Analysis of SPAG6 mRNA expression in bone marrow samples ofAML patienpublished in TCGA(A) Differential expression of SPAG6 mRNA in published profiles from bone marrowecimens of patients with AML. (B) Kaplan-Meier overall survival curves for all 135 patwithAML stratified by high and low expression of SPAG6. ***p＜0.001. 检测慢病毒载体转染 SKM-1 细胞效果用本课题组前期已经筛选好最佳靶序列的 SPAG6-shRNA 慢病毒转染对SKM-1 细胞，以 MOI 值 40 转染，经过 0.5μg/ml 嘌呤霉素完全培养基培养通完全培养基。感染后 6 天倒置荧光显微镜下观察转染后细胞 GFP 荧光：细胞抱团生长，大量绿色荧光蛋白表达使细胞呈绿色；取一部分转染流式细胞术检测细胞转染率，结果显示转染率均在 80%以上(图 3)。

图 3 慢病毒载体转染 SKM-1 细胞Figure3 SKM-1 cells were transfected with lentivirus vectornsense negative control group; SPAG6-LV，short hairpin RNA(shRvector group. SPAG6 基因的干预效果载体转染 SKM-1 细胞后，取转染培养后 7 天的 Blank、 组细胞，分别提取各组细胞的总 RNA 与总蛋白，用 qRT-PCR析 SPAG6 基因的干预效果，结果表明 SPAG6-LV 组细胞 SP 4)。


本文编号：3504355