全外显子测序发现遗传性心脏传导疾病致病基因SCN5A新突变

发布时间：2021-11-20 01:40

　　背景：全外显子测序是近年来逐步兴起的一种第二代测序技术。通过外显子捕获芯片以及边合成边测序技术,全外显子测序可在极短时间内获得海量的测序信息。与传统的Sanger测序法相比,它具有高效便捷的特点,可以以相对低廉的成本同时完成上万个基因的测序。自2009年美国学者Ng等首次运用全外显子测序分析单基因孟德尔遗传病以来,目前通过此方法已有数十个遗传病的致病基因被发现。运用全外显子测序对遗传性心脏病的研究多集中于心肌病,相继发现了致心律失常性右室心肌病致病基因DES、肥厚型心肌病致病基因MRPL44、MTO1、AGK、MRPL3、AARS2以及扩张性心肌病致病基因BAG3、GATAD1,而有关心律失常的报道相对较少。本课题通过全外显子测序研究了一个遗传性心脏传导疾病家系,旨在找出致病基因,为疾病发病机制的研究提供参考资料,同时也为将来产前诊断、遗传咨询以及基因诊断提供帮助。目的：探查一个遗传性心脏传导疾病家系的致病基因。方法：首先通过心电图与询问病史对一个包含5代37人的大家系进行心脏传导疾病的筛查,并采集外周血样以提取gDNA;接着选取其中的三名患者与一名正常人进行全外显子测序,并利用dbS... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：85 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

“overlap”法示意图

27 g、0.5 M EDTA(PH8.0)EDTA 10ml,然后加入蒸馆水使总体积增至500ml，棒搅拌后震荡摇匀使硼酸以及Tris溶于蒸馆水中形成5XTBE电泳缓冲液，500 ml试剂瓶中保存。使用前再稀释10倍成0.5 XTBE的工作液。2)琼脂糖凝胶配制：取一洁净的100 ml锥形瓶，加入0.8 g琼脂糖以及70 mlXTBE工作液，于微波炉中中火加热煮沸2 min，震荡摇匀使琼脂糖充分溶解BE中，加入Goldviewl型核酸染色剂6 ^1后摇勾。3)将配好凝胶倒入制胶板上，注意不要溢出，小心插好梳子。在室温下放置时，待其固化后转入电泳槽内。4)向电泳槽内加入0.5XTBE工作液，小心排出凝胶孔内气泡，在凝胶边缘第一个孔内点入TaKaRa公司生产的DL2000TM DNA MARKER 3 作为分标尺，其他孔内分别点入3 ^1各样本PCR扩增后的产物。5)加样完成后,通电100 V恒压电泳15 min。6)在SYBGREEN灯下，PCR产物存在则显影为白色，采用凝胶成像系统照相（图2-3)。

钾通道（IfCS)。KCNQ1基因突变后可引起Kv7.1通道相应氨基酸的改变，导致结构紊乱，进而减弱Kv7.1通道的功能，导致Iks通道功能减退而阻碍心室细胞复极3期钾离子的外流，最终造成心室复极时间延长，在心电图上表现为QT间期的延长。常见的LQT1型心电图改变包括以下三种：（1) T波基底增宽，起点不明显；（2) T波基底增宽，呈非对称性高餘；（3) T波形态正常，出现延迟[26]。另外，由于Iks通道钾离子外流为心率加快时的主要复极电流，因而运动（尤其是游泳）以及情绪激动等加快心率的行为容易诱发LQT1综合征患者出现心率失常[27]，而减慢心率的药物如e -阻滞剂则对LQT1综合征具有非常好的疗效。目前在KCNQ1基因上共有400多个变异被报道可引起LQT1综合征，其中大多数为错义突变，其次为移码突变，突变类型分布见图1。变异的热点外显子包括6号、3号以及7号，三者共占到变异总数的38%。具体到单个密码子则7号外显子上的314密码子、341密码子和344密码子均有大量文献多次报道，涉及跨膜区域的突变往往症状较为严重[28]。另有少数外显子的突变可引起多个综合征。

【参考文献】：
期刊论文
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[7]左心交感神经切除术治疗室性心律失常的历史与现状[J]. 赵博,李剑锋,李翠兰.  中国心脏起搏与心电生理杂志. 2011(02)



本文编号：3506308