CD137-CD137L信号通过JNK通路影响小鼠血管平滑肌细胞自噬
发布时间：2021-11-21 09:28
目的探讨CD137-CD137L信号是否通过c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）通路影响小鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）自噬。方法组织块贴壁法进行C57BL/6J小鼠胸主动脉VSMCs原代培养。将培养的原代小鼠VSMCs分为四组,即对照组、CD137激动组、DMSO（二甲基亚砜）组及JNK抑制组。采用Western blot检测各组磷酸化c-Jun氨基末端激酶（phosphorylate c-Jun N-terminal kinase,p-JNK）、微管相关蛋白1轻链3II（microtubule associated protein1 light chain3 II,LC3II）及Sequestosome1（p62/SQSTMl）蛋白表达水平;自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）荧光显微镜观察自噬流变化;透射电镜观察细胞内自噬小体及自噬溶酶体变化。结果（1）激动CD137-CD137L信号,小鼠VSMCs中p-JNK表达上升（P<0.05 vs对照组）,同时自噬起始相关蛋...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1.显微镜观察小鼠原代VSMCs及α-SMA荧光染色Figure2.3.1.MicroscopyobservationofmouseprimaryVSMCsandα-SMAfluorescencestaining
图 2.3.2. 不同浓度 SP600125 对 JNK 通路的抑制效果Figure 2.3.2. The effects of different concentrations of SP600125 on JNK Pathway.3 激动 CD137-CD137L 信号上调小鼠 VSMCs 中 p-JNK 表达在混合炎症因子刺激 24 小时后，小鼠 VSMCs 细胞分为四组：对照组；CD137 激组（终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）；JNK 抑制组（10μM 的 SP600125 预处理min 后加入终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）；DMSO 组（与 JNK 抑制组等量二基亚砜预处理 30min 后加入终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）。Western blot 显示137 激动组 p-JNK 蛋白表达水平较对照组增高（1.15±0.19 比 0.72±0.21，P＜0.05），作用在加入 SP600125 后被抑制（0.61±0.21 比 1.15±0.19，P＜0.05）。而 DMSO 组 p-JNK白表达水平与 CD137 激动组相比无明显差异（P＞0.05）（图 2.3.3）
图 2.3.2. 不同浓度 SP600125 对 JNK 通路的抑制效果Figure 2.3.2. The effects of different concentrations of SP600125 on JNK Pathway2.3.3 激动 CD137-CD137L 信号上调小鼠 VSMCs 中 p-JNK 表达在混合炎症因子刺激 24 小时后，小鼠 VSMCs 细胞分为四组：对照组；CD137 激动组（终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）；JNK 抑制组（10μM 的 SP600125 预处理30min 后加入终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）；DMSO 组（与 JNK 抑制组等量二甲基亚砜预处理 30min 后加入终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）。Western blot 显示CD137 激动组 p-JNK 蛋白表达水平较对照组增高（1.15±0.19 比 0.72±0.21，P＜0.05），该作用在加入 SP600125 后被抑制（0.61±0.21 比 1.15±0.19，P＜0.05）。而 DMSO 组 p-JNK蛋白表达水平与 CD137 激动组相比无明显差异（P＞0.05）（图 2.3.3）
【参考文献】：
期刊论文
[1]血管钙化的骨调控机制新进展[J]. 王中群,戴俏武,邵晨,严金川. 中华心血管病杂志. 2017 (01)
[2]CD137-CD137L信号通路通过调控小鼠血管平滑肌细胞自噬小体出胞影响动脉粥样硬化钙化形成[J]. 李波,李晓阳,仲威,邵晨,王中群,袁伟,严金川. 中华心血管病杂志. 2017 (01)
[3]CD137-CD137L信号通过TRAF6/JNK/AP-1通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达[J]. 徐源,王中群,仲威,邵晨,李波,刘俊,李晓阳,严金川. 中国动脉硬化杂志. 2017(01)
[4]CD137-CD137L信号通路对小鼠动脉粥样斑块及血管平滑肌细胞钙化的影响[J]. 陈瑶,严金川,翁嘉懿,王中群,王翠平,邵晨. 中华心血管病杂志. 2016 (10)
本文编号：3509241
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1.显微镜观察小鼠原代VSMCs及α-SMA荧光染色Figure2.3.1.MicroscopyobservationofmouseprimaryVSMCsandα-SMAfluorescencestaining
图 2.3.2. 不同浓度 SP600125 对 JNK 通路的抑制效果Figure 2.3.2. The effects of different concentrations of SP600125 on JNK Pathway.3 激动 CD137-CD137L 信号上调小鼠 VSMCs 中 p-JNK 表达在混合炎症因子刺激 24 小时后，小鼠 VSMCs 细胞分为四组：对照组；CD137 激组（终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）；JNK 抑制组（10μM 的 SP600125 预处理min 后加入终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）；DMSO 组（与 JNK 抑制组等量二基亚砜预处理 30min 后加入终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）。Western blot 显示137 激动组 p-JNK 蛋白表达水平较对照组增高（1.15±0.19 比 0.72±0.21，P＜0.05），作用在加入 SP600125 后被抑制（0.61±0.21 比 1.15±0.19，P＜0.05）。而 DMSO 组 p-JNK白表达水平与 CD137 激动组相比无明显差异（P＞0.05）（图 2.3.3）
图 2.3.2. 不同浓度 SP600125 对 JNK 通路的抑制效果Figure 2.3.2. The effects of different concentrations of SP600125 on JNK Pathway2.3.3 激动 CD137-CD137L 信号上调小鼠 VSMCs 中 p-JNK 表达在混合炎症因子刺激 24 小时后，小鼠 VSMCs 细胞分为四组：对照组；CD137 激动组（终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）；JNK 抑制组（10μM 的 SP600125 预处理30min 后加入终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）；DMSO 组（与 JNK 抑制组等量二甲基亚砜预处理 30min 后加入终浓度 10μg/ml 的 CD137L 重组蛋白）。Western blot 显示CD137 激动组 p-JNK 蛋白表达水平较对照组增高（1.15±0.19 比 0.72±0.21，P＜0.05），该作用在加入 SP600125 后被抑制（0.61±0.21 比 1.15±0.19，P＜0.05）。而 DMSO 组 p-JNK蛋白表达水平与 CD137 激动组相比无明显差异（P＞0.05）（图 2.3.3）
【参考文献】：
期刊论文
[1]血管钙化的骨调控机制新进展[J]. 王中群,戴俏武,邵晨,严金川. 中华心血管病杂志. 2017 (01)
[2]CD137-CD137L信号通路通过调控小鼠血管平滑肌细胞自噬小体出胞影响动脉粥样硬化钙化形成[J]. 李波,李晓阳,仲威,邵晨,王中群,袁伟,严金川. 中华心血管病杂志. 2017 (01)
[3]CD137-CD137L信号通过TRAF6/JNK/AP-1通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达[J]. 徐源,王中群,仲威,邵晨,李波,刘俊,李晓阳,严金川. 中国动脉硬化杂志. 2017(01)
[4]CD137-CD137L信号通路对小鼠动脉粥样斑块及血管平滑肌细胞钙化的影响[J]. 陈瑶,严金川,翁嘉懿,王中群,王翠平,邵晨. 中华心血管病杂志. 2016 (10)
本文编号：3509241
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