钠氢交换体NHE1在高盐诱导血管平滑肌细胞增殖和钙离子调控中的作用
本文关键词：钠氢交换体NHE1在高盐诱导血管平滑肌细胞增殖和钙离子调控中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:本课题旨在观察钠氢交换体(Na+/H+exchanger,NHE1)在高盐诱导的血管平滑肌细胞增殖中的表达,并初步探讨其在高盐诱导的血管平滑肌细胞增殖中作用。方法:(1)盐浓度、NHE1阻断剂(Amiloride)浓度及作用时间的确定:取大鼠腹主动脉采用组织块贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),实验分为对照组(Na+浓度139mmol/L),高盐组(Na+浓度159mmol/L),高盐+阻断剂组(Na+浓度159mmol/l+Amiloride浓度10μM、20μM、30μM、40μM)。利用MTT比色法检测不同浓度的Amiloride对高盐干预的VSMC增殖的影响,以确定Amiloride的最佳干预浓度。(2)效应和机制分析:VSMC无血清同步化24h后,实验分为对照组(Na+浓度139mmol/L),对照+阻断剂组(Na+浓度139mmol/L+Amiloride浓度30μM),高盐组(Na+浓度159mmol/L),高盐+阻断剂组(Na+浓度159mmol/l+Amiloride浓度30μM)继续培养72h后进行以下实验:超微量Ca~(2+)-ATPase测试试剂盒测定细胞膜钙泵活性;细胞免疫荧光、real-time PCR及Western Blot检测大鼠VSMC中NHE1、NCX-1、PMCA4基因与蛋白表达,应用比率荧光法检测各组VSMC内钙离子的浓度及细胞内p H值。结果:MTT法显示高盐+阻断剂组(Amiloride浓度为30μM)增殖能力较高盐组明显减弱。与对照组比较,高盐组NHE1、NCX-1、PCNA蛋白表达增加,PMCA4蛋白表达降低,细胞内钙离子浓度及p H值明显增加,(P㩳0.05)。同时,NHE1、NCX-1 m RNA表达增加(P㩳0.05),PMCA4 m RNA表达无明显差别(P㧐0.05);与高盐组相比,高盐+阻断剂组NHE1、NCX-1、PCNA蛋白以及NHE1、NCX-1 m RNA表达下调(P㩳0.05),PMCA4蛋白和m RNA表达无明显差别(P㧐0.05),细胞内钙离子浓度及细胞内p H值明显降低(P㩳0.05)。结论:(1)高盐能诱导大鼠血管平滑肌细胞发生增殖,并且细胞内游离钙离子浓度和p H值升高;(2)高盐上调了NHE1的表达,阻断细胞NHE1的表达能够部分抑制高盐诱导VSMC的增殖,降低细胞内NCX-1的表达及细胞内游离钙离子浓度和p H值。
【关键词】：高盐 血管平滑肌细胞 钠氢交换体 阿米洛利
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1
【目录】：
- 中英缩略词对照表4-5
- 中文摘要5-7
- 英文摘要7-9
- 前言9-11
- 材料与方法11-23
- 结果23-37
- 讨论37-40
- 结论40-41
- 参考文献41-44
- 综述44-51
- 参考文献48-51
- 致谢51-52
- 作者简介52
【参考文献】
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本文编号：352011
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