盲肌样蛋白1（MBNL1）在血管平滑肌细胞表型转换中作用的研究

发布时间：2021-12-11 05:51

　　目的:血管重构、血管平滑肌表型转换是动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、高血压等多种心血管疾病的发病基础。本实验的目的是探究盲肌样蛋白1（MBNL1）在血管重构以及血管平滑肌细胞（VSMCs）表型转换中的作用和意义。方法:建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,HE染色观察内膜新生情况,蛋白免疫印迹及免疫荧光技术检测损伤组和对照组MBNL1表达水平。PDGF-bb刺激大鼠VSMCs建立血管平滑肌细胞表型转换模型,蛋白免疫印迹检测不同浓度及不同时间点MBNL1蛋白水平变化。予以慢病毒（Lv-MBNL1）过表达MBNL1,予以siRNA（siRNA-MBNL1）敲低MBNL1,蛋白免疫印迹检测收缩基因（a-SMA、MYH11、SM22）表达变化,Transwell检测VSMCs迁移能力,Edu检测VSMCs增殖能力。结果:MBNL1在损伤组血管中表达量增加,且MBNL1主要表达于血管平滑肌当中。在PDGF-bb作用下,大鼠VSMCs中MBNL1表达上调。过表达MBNL1,大鼠VSMCs收缩基因表达上调,敲低MBNL1结果相反。过表达MBNL1抑制VSMCs的迁移能力,敲低MBNL1促进迁移。过表达或者敲... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大鼠颈动脉损伤模型中MBNL1的表达量变化

图 2.C PDGF-bb 刺激大鼠 VSMCs 后 MBNL1 表达量变化。（A）大鼠 VSMCs 免疫荧光，红光代表 a-SMA，蓝光代表细胞核；（B）予以 20ng/ml PDGF-bb 刺激大鼠 VSMCs,检测 0h、24h、48h、72h 后 MBNL1 表达量，选取 a-Tubulin 作为内参；（C）分别予以 10ng/ml、20ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml PDGF-bb 作用于大鼠 VSMCs， 48h 后 western blot 检测各组 MBNL1、a-SMA 表达量，选取 a-Tubulin 作为内参，*代表各组与对照组相比有统计学差异，p<0.05。3.3 过表达及敲低 MBNL1 效率检测构建并包装 MBNL1 过表达慢病毒及对照慢病毒后感染大鼠 VSMCs，提取总蛋白检测 MBNL1 表达量，提示慢病毒过表达成功（图 3.A）。分别转染 siRNA-nc 及三条 MBNL1 siRNA，提取总蛋白检测 MBNL1 表达量，结果显示三条 siRNA 均可敲低 MBNL1,其中 siRNA-1 敲低效率为 49.2%，siRNA-2 敲低效率为 75.1%，siRNA-3敲低效率为 53.3%（图 3.B），因此后续实验选用第二条序列。

达及敲低 MBNL1 效率检测（A）western blot 检测慢病毒感染 VSMCs 7，选用 a-Tubulin 作为内参；（B）siRNA-nc、siRNA-1、siRNA-2、s鼠 VSMCs，48h 后提取总蛋白，检测 MBNL1 表达量，选用 a-Tubulin NL1 促进大鼠 VSMCs 收缩基因表达达 MBNL1，检测 VSMCs 中 a-SMA、MYH11 及 SM22 表达量，过表收缩蛋白表达均上调（图 4.A-C），其中 a-SMA 表达量为对照c 组和 Lv-MBNL1 组：1 vs 1.41±0.11，p=0.024），MYH11 为Lv-nc 组和 Lv-MBNL1 组：1 vs 1.94±0.33，p=0.040），SM的 1.41 倍（Lv-nc 组和 Lv-MBNL1 组：1 vs 1.41±0.11，pL1之后，a-SMA表达量下降31%，但是两组差异没有统计学意义（NA-MBNL1 组：1 vs 0.68±0.22，p=0.068，图 4.D），MYH11nc 组和 siRNA-MBNL1 组：1 vs 0.46±0.05，p=0.000，图 4


本文编号：3534123