Erk1/2磷酸化在曲前列环素抑制肺动脉平滑肌细胞增殖作用中的研究
发布时间：2021-12-22 05:04
目的肺动脉高压（PAH）的特征性病理变化是肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）异常增殖,导致肺小动脉管腔进行性狭窄,儿童也是发生PAH的主要人群之一。Erk1/2的磷酸化与多种细胞的增殖相关。曲前列环素（Trep）近期已用于治疗PAH,其机制需进一步研究探讨。本研究以PASMCs为研究对象,探讨Trep对PAMSCs增殖的影响及Erk1/2磷酸化水平的变化,旨在探究治疗PAH的新思路。方法复苏PASMCs,显微镜下观察细胞形态,免疫荧光方法鉴定细胞。使用不同浓度的血小板衍生生长因子（PDGF）促进PAMSCs增殖,找到合适浓度的PDGF建立增殖模型。先观察Trep对PAMSCs增殖的影响并检测Erk1/2磷酸化水平,实验分为:对照组,Trep组,PDGF组,PDGF+Trep组。显微镜下观察各组细胞形态,MTT法检测各组细胞活性,Western Blot法检测各组细胞内增殖细胞核抗原（PCNA）、t-Erk1/2及p-Erk1/2蛋白表达;再使用Erk1/2磷酸化抑制剂PD98059代替Trep,重复上述实验,观察PD98059对PAMSCs增殖的影响及Erk1/2磷酸化水平。结果（1）P...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
肺动脉平滑肌细胞形态观察以及α-SMA免疫荧光鉴定
图 3.1 96 孔板示意图Figure 3.1 schematic diagram of cell culture plate注意事项：在孔内加入蛋白标准品工作液以及 AB 工作液时，勿产生气（9）分离胶与浓缩胶配制：取 1.5mm 规格玻璃板，使用双蒸水洗净后干燥，放入夹板中，向空隙内加入双蒸水检漏 5 分钟，若水平面下降不明表示不漏。检漏后倒扣，再次待干燥。因本次实验检测蛋白分子量在 30-5，故选用 12%SDS-PAGE 分离胶（下层胶，最佳分离范围 12-60kD）。取 5杯，用双蒸水洗净后待自然干燥，加入 3mL 双蒸水，6mL30%Acr-Bis，5 Tris（pH8.8），0.15mL 10% SDS，0.15mL 10%过硫酸铵，轻轻搅拌混匀取 0.006mLTEMED 加入上述混合液中，再次搅拌，加入玻璃板缝隙中，入异丙醇覆盖。待下层胶凝固后（室温下约 1 小时），配制浓缩胶（上层 50mL 烧杯，用双蒸水洗净后待自然干燥，加入 4.1mL 双蒸水，1mL30%
出梳子时需垂直向上，勿左右晃动；孔内加电转：裁剪合适大小的 PVDF 膜，并做好标醇中备用，将 2 片转膜滤纸浸泡于 1×电转出玻璃板，浸泡于 1×电转液中，使用小塑料片转膜滤纸上，使用光滑玻璃棒挤去凝胶与 PVDF 膜，将 PVDF 膜放置于转膜滤纸上，胶之间的气泡挤去。将另一片转膜滤纸覆盖气泡。按图 3.3 所示将夹板夹紧（从上至下—PVDF 膜——凝胶——转膜滤纸——黑入适当的 4℃1×电转液，并放入冰盒，并在，注意正负极。将参数设置为电流 300mA内开始电转。
【参考文献】：
期刊论文
[1]治疗肺动脉高压药物赛乐西帕[J]. 郭宗儒,Asaki T,Kuwano K,Morrison K. 药学学报. 2018(12)
[2]曲前列环素对大鼠肺动脉高压模型的治疗作用及其机制[J]. 张霞,王杨纪,王骞,王艳,吕季阳,吕进泉. 江苏大学学报(医学版). 2016(06)
[3]改良前处理的原代组织块贴壁法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞[J]. 华亮,朱玲,钱志强,岳云,李叶丽,杨丹莉. 遵义医学院学报. 2016(02)
[4]前列环素及其类似物在肺动脉高压中的应用[J]. 颜平,宁宁,荆志成. 世界临床药物. 2014(06)
[5]机械牵张力和去甲肾上腺素协同激活小鼠血管平滑肌细胞α1-肾上腺素能受体-ERK1/2信号促进细胞增殖[J]. 刘树迎,李宇煌,张征宇,张敏,汪照静,李晨,宁粉,黄锦桃,李朝红. 中国动脉硬化杂志. 2011(03)
[6]ERK对慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞凋亡的影响[J]. 白晶,刘先胜,徐永健,张珍祥,谢敏,倪望. 细胞与分子免疫学杂志. 2010(08)
[7]细胞外信号调节激酶1／2信号通路在慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞迁移功能变化中的调控作用[J]. 谢敏,刘先胜,徐永健,张珍祥,白晶,倪望,陈士新. 生理学报. 2007(01)
博士论文
[1]TMEM16A对高肺血流性肺动脉高压调控机制的研究[D]. 王凯.广西医科大学 2015
硕士论文
[1]FPR和TLR9在缺氧时血管平滑肌细胞炎症因子IL-6和IL-8产生中的作用[D]. 史诗.重庆医科大学 2018
[2]血流动力学变化对血管重构调控机制初步实验研究[D]. 郭占芳.中国人民解放军医学院 2015
本文编号：3545813
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
肺动脉平滑肌细胞形态观察以及α-SMA免疫荧光鉴定
图 3.1 96 孔板示意图Figure 3.1 schematic diagram of cell culture plate注意事项：在孔内加入蛋白标准品工作液以及 AB 工作液时，勿产生气（9）分离胶与浓缩胶配制：取 1.5mm 规格玻璃板，使用双蒸水洗净后干燥，放入夹板中，向空隙内加入双蒸水检漏 5 分钟，若水平面下降不明表示不漏。检漏后倒扣，再次待干燥。因本次实验检测蛋白分子量在 30-5，故选用 12%SDS-PAGE 分离胶（下层胶，最佳分离范围 12-60kD）。取 5杯，用双蒸水洗净后待自然干燥，加入 3mL 双蒸水，6mL30%Acr-Bis，5 Tris（pH8.8），0.15mL 10% SDS，0.15mL 10%过硫酸铵，轻轻搅拌混匀取 0.006mLTEMED 加入上述混合液中，再次搅拌，加入玻璃板缝隙中，入异丙醇覆盖。待下层胶凝固后（室温下约 1 小时），配制浓缩胶（上层 50mL 烧杯，用双蒸水洗净后待自然干燥，加入 4.1mL 双蒸水，1mL30%
出梳子时需垂直向上，勿左右晃动；孔内加电转：裁剪合适大小的 PVDF 膜，并做好标醇中备用，将 2 片转膜滤纸浸泡于 1×电转出玻璃板，浸泡于 1×电转液中，使用小塑料片转膜滤纸上，使用光滑玻璃棒挤去凝胶与 PVDF 膜，将 PVDF 膜放置于转膜滤纸上，胶之间的气泡挤去。将另一片转膜滤纸覆盖气泡。按图 3.3 所示将夹板夹紧（从上至下—PVDF 膜——凝胶——转膜滤纸——黑入适当的 4℃1×电转液，并放入冰盒，并在，注意正负极。将参数设置为电流 300mA内开始电转。
【参考文献】：
期刊论文
[1]治疗肺动脉高压药物赛乐西帕[J]. 郭宗儒,Asaki T,Kuwano K,Morrison K. 药学学报. 2018(12)
[2]曲前列环素对大鼠肺动脉高压模型的治疗作用及其机制[J]. 张霞,王杨纪,王骞,王艳,吕季阳,吕进泉. 江苏大学学报(医学版). 2016(06)
[3]改良前处理的原代组织块贴壁法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞[J]. 华亮,朱玲,钱志强,岳云,李叶丽,杨丹莉. 遵义医学院学报. 2016(02)
[4]前列环素及其类似物在肺动脉高压中的应用[J]. 颜平,宁宁,荆志成. 世界临床药物. 2014(06)
[5]机械牵张力和去甲肾上腺素协同激活小鼠血管平滑肌细胞α1-肾上腺素能受体-ERK1/2信号促进细胞增殖[J]. 刘树迎,李宇煌,张征宇,张敏,汪照静,李晨,宁粉,黄锦桃,李朝红. 中国动脉硬化杂志. 2011(03)
[6]ERK对慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞凋亡的影响[J]. 白晶,刘先胜,徐永健,张珍祥,谢敏,倪望. 细胞与分子免疫学杂志. 2010(08)
[7]细胞外信号调节激酶1／2信号通路在慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞迁移功能变化中的调控作用[J]. 谢敏,刘先胜,徐永健,张珍祥,白晶,倪望,陈士新. 生理学报. 2007(01)
博士论文
[1]TMEM16A对高肺血流性肺动脉高压调控机制的研究[D]. 王凯.广西医科大学 2015
硕士论文
[1]FPR和TLR9在缺氧时血管平滑肌细胞炎症因子IL-6和IL-8产生中的作用[D]. 史诗.重庆医科大学 2018
[2]血流动力学变化对血管重构调控机制初步实验研究[D]. 郭占芳.中国人民解放军医学院 2015
本文编号：3545813
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