慢病毒载体介导ZO-1基因感染iPS细胞的实验研究

发布时间：2021-12-28 19:48

　　目的：有关心血管疾病的基础研究中,证实闰盘相关基因Z0-1在心肌不同病理情况下有不同的改变,并与已明确同心肌电生理相关的Cx43分子存在相互作用。本实验欲构建猪Z0-1基因的重组慢病毒表达载体,用其病毒液感染猪iPS细胞,以获得携带该目的基因的猪iPS细胞。方法：分析Genbank的猪Z0-1mRNA序列,设计分别含有BamHI、SalI酶切位点的Z0-1基因上下游引物,PCR扩增该基因,将其连接入载体,构建Lenti-EF1α-EGFP-TRE-Z01重组慢病毒表达载体,挑选正确的克隆进行测序鉴定。在此基础上,使用慢病毒包装质粒pVSVG、质粒delta8.91和Fugene转染试剂一同转染293T细胞,获得病毒液,检测病毒滴度,感染猪iPS细胞。结果：成功构建了含有猪Z0-1基因的重组表达载体,通过酶切鉴定及测序鉴定证明结果与所设计序列相同。并成功包装出慢病毒,获得滴度为1.42*108IU/ml的病毒液,成功感染猪iPS细胞。结论：本课题成功构建慢病毒载体Lenti-EF1α-EGFP-TRE-Z01,及滴度为1.42*108IU/ml的病毒液感染猪iPS细胞,为研究Z0-1的基... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Z01DAPI染色结果

3-5、3-6分别为Lenti-EFl a -EGFP-TRE-ZOl转染后的绿色焚色结果，根据以上图片计算得出的滴度为：Lenti-EF1 a-EGFP-

Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Z01病毒感染猪ips细胞

【参考文献】：
期刊论文
[1]靶向Bi-1基因的重组慢病毒载体构建及其在NIH3T3细胞中的表达[J]. 李祥勇,罗海清,林观平,周克元.  医学研究生学报. 2010(12)
[2]人高迁移率族蛋白组A1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定[J]. 金志良,孙新臣,成红艳,魏青,何少忠.  医学研究生学报. 2008(05)
[3]慢病毒载体构建策略及生物安全性研究进展[J]. 尹春光,杜立新.  动物医学进展. 2008(02)
[4]慢病毒载体的设计及应用进展[J]. 王淑艳,张愚.  中国生物工程杂志. 2006(11)

博士论文
[1]iPS细胞分化的心脏前体细胞移植改善心梗小鼠心脏功能及机制研究[D]. 刘隽炜.华中科技大学 2011



本文编号：3554626