抑制外泌体释放对骨髓间充质干细胞的增殖及氧化应激耐受性的影响

发布时间：2021-12-31 13:34

　　【背景】心肌梗死是所有心血管疾病患者死亡的主要原因之一,现阶段对心肌梗死的治疗因种种的局限使治疗效果不能令人十分满意。这些年来,我们努力寻找各种治疗方法来促进心肌梗死后心肌的修复和再生;其中移植干细胞疗法备受关注;当前大量研究工作都致力于MSCs及其释放的外泌体在心肌梗死部位发挥心肌保护作用的具体机制,却很少关注外泌体的释放对MSCs本身发挥生物学效应的影响。本文就抑制外泌体的释放对MSCs的增殖能力以及氧化应激耐受性的影响做初步研究。【目的】探讨抑制外泌体释放对骨髓间充质干细胞的增殖及氧化应激耐受性的影响及其初步机制研究。【研究方法】1.首先构建Rab27a敲除小鼠的构建,我们利用TALEN技术靶向性敲除C57BL/6J小鼠Rab27a基因,随后通过表型、基因测序以及Rab27a蛋白的表达来对F1代小鼠进行鉴定,以此来挑选敲除Rab27a的纯合子小鼠,并用纯合子进行繁殖,用作后续的实验。2.为了验证敲除Rab27a后对小鼠骨髓来源的间充质干细胞释放外泌体的影响。我们通过分离并培养野生型小鼠及Rab27a敲除纯合子小鼠骨髓间充质干细胞,采用第3-8代性状稳定的原代间充质干细胞进行后续实... 

【文章来源】：广州医科大学广东省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Rab27a敲除小鼠的构建

图 2.敲除 Rab27a 引起 MSCs 释放外泌体的变化. 抑制外泌体释放引起 MSCs 增殖能力降低Edu 实验结果显示在荧光显微镜下增殖期的 MSCs 发红色荧光(图 3A)，用 imagero plus 6.0 计算红色荧光及绿色荧光的数量，并经过 SPSS 19.0 统计可知，KO- MSCs增殖能力显著低于 WT-MSCs (图 3B)。同时用 WB 检测 KO-MSCs 和 WT-MSCs 中殖细胞核抗原（PCNA）的表达量(图 3C 及 3D)。由此可知抑制外泌体释放引起SCs 增殖能力明显降低。

图 2.敲除 Rab27a 引起 MSCs 释放外泌体的变化抑制外泌体释放引起 MSCs 增殖能力降低Edu 实验结果显示在荧光显微镜下增殖期的 MSCs 发红色荧光(图 3A)，用 imageo plus 6.0 计算红色荧光及绿色荧光的数量，并经过 SPSS 19.0 统计可知，KO- MSCs增殖能力显著低于 WT-MSCs (图 3B)。同时用 WB 检测 KO-MSCs 和 WT-MSCs 中殖细胞核抗原（PCNA）的表达量(图 3C 及 3D)。由此可知抑制外泌体释放引起SCs 增殖能力明显降低。


本文编号：3560350