CBD-VMP/c-ECM胶原蛋白水凝胶促进血管生成改善心肌梗死大鼠心脏功能的研究
发布时间：2021-12-31 14:59
研究目的:血液循环的重建是治疗心肌梗死（myocardial infarction,MI）的有效方法。据报道,源自血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的特异性血管生成肽（VEGF mimic peptides,VMP）可以激活其受体,具有与VEGF相似的促进血管生成的活性。然而,它是否可在心肌梗死的治疗中发挥有效作用并不清楚。在本研究中,为了提高在缺血区的有效治疗浓度,我们构建了可与胶原蛋白特异性结合的靶向肽CBD-VMP肽,该靶向肽由于胶原结合域（collagen binding domain,CBD）的存在可与胶原特异性结合而不影响VMP的促进血管生成作用。随后,我们将其与脱细胞的心脏细胞外基质（cardiac extracellular matrix,c-ECM）胶原蛋白水凝胶结合后,共同注射到大鼠心肌梗死部位,研究CBD-VMP/c-ECM胶原蛋白水凝胶在心肌梗死中的治疗效果。研究内容和方法:1.通过一系列脱细胞基质操作获得可注射的c-ECM凝胶,并使c-ECM凝胶与胶原蛋白凝胶以1:1的比例混合得到c-ECM胶原蛋...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脱细胞c-ECM的形态和结构特征
青岛大学硕士学位论文12CBD-VMP肽和VMP肽的浓度上调，与VMP肽相比，更多的CBD-VMP肽保留在胶原凝胶上，使较大浓度的肽保留在心肌梗死区成为可能。图3.CBD-VMP肽与胶原蛋白的特异性结合Fig.3SpecificbindingofCBD-VMPpeptidewithcollagenSpecificbindingofCBD-VMPpeptidewithtypeIcollagenwereestimatedbyELISAmethod.**p<0.01,comparedwiththe0pMgroupforthesamesubstance.#p<0.05,theCBD-VMPgroupcomparedwiththeVMPgroup.n=5ineachgroup.4.CBD-VMP肽在皮下移植中促进血管生成能力的检测在体外的细胞实验中CBD-VMP肽具有刺激HUVEC增殖的能力，故将各种肽加载到胶原蛋白支架上（如图1A），并皮下植入大鼠体内。植入后两周，肉眼可观察到：与对照组（PBS/collagen）和VMP/collagen组相比，CBD-VMP/collagen组（F=11.83，q=6.875，n=5，P<0.01）有更多的细胞浸润和血管形成（图4A），这些结果可被HE染色所证实（图4B,D）。此外，α-SMA是血管的特异性标志物，α-SMA的免疫染色表明支架内的新生血管形成是由VMP肽诱导的。并且与PBS/collagen组相比，VMP/collagen和CBD-VMP/collagen组（F=20.55，q=8.795，n=5，P<0.01）诱导的新生血管生成更显著。但是由于CBD的存在，CBD-VMP肽能特异性结合至胶原蛋白支架上，使更多的肽保留在支架中以提高肽的有效浓度，从而更有效的促进支架材料上血管新生（图4C,E）。
结果13图4.大鼠皮下移植CBD-VMP肽对血管生成的影响Fig.4EffectsofCBD-VMPpeptidescombiningcollagenscaffoldsonangiogenesisinasubcutaneouslytransplantedratmodel(A)Morphologyofscaffoldaftersubcutaneouslytransplantedinrat;(B)HEstainingofscaffolds；(C)Immunostainingofspecificmarkerofarterioleα-SMAinthescaffolds;(D)Numberofcellsinthescaffolds;(E)Numbersofarteriolesinthescaffolds.n=5ineachgroup.**P<0.01comparedwiththecontrolgroup.5.TTC染色法验证大鼠心肌梗死模型制备成功在制备大鼠心肌梗死模型过程中，用6-0丝线闭塞左冠状动脉前降支（leftanteriordescendingcoronaryartery,LAD）后，肉眼可见心脏左室壁明显变白或形成暗灰色。TTC染色结果如图5所示：红色部分为非梗死区，白色部分为心肌梗死区，证明大鼠心肌梗死模型制备成功。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Revascularization strategies for patients with myocardial infarction and multi-vessel disease: A critical appraisal of the current evidence[J]. Muhammad O Zaman,Mohammad K Mojadidi,Islam Y Elgendy. Journal of Geriatric Cardiology. 2019(09)
[2]生物材料治疗心肌梗死疾病的应用进展[J]. 任珊,蒋学俊. 心血管病学进展. 2013(06)
[3]组织和器官脱细胞方法的研究进展[J]. 陈博,彭代智. 中华损伤与修复杂志(电子版). 2012(06)
[4]分子生物学在组织工程学研究中的应用前景[J]. 郭晓东,杜靖远,郑启新,刘勇,段德宇. 中华实验外科杂志. 2001(03)
本文编号：3560465
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脱细胞c-ECM的形态和结构特征
青岛大学硕士学位论文12CBD-VMP肽和VMP肽的浓度上调，与VMP肽相比，更多的CBD-VMP肽保留在胶原凝胶上，使较大浓度的肽保留在心肌梗死区成为可能。图3.CBD-VMP肽与胶原蛋白的特异性结合Fig.3SpecificbindingofCBD-VMPpeptidewithcollagenSpecificbindingofCBD-VMPpeptidewithtypeIcollagenwereestimatedbyELISAmethod.**p<0.01,comparedwiththe0pMgroupforthesamesubstance.#p<0.05,theCBD-VMPgroupcomparedwiththeVMPgroup.n=5ineachgroup.4.CBD-VMP肽在皮下移植中促进血管生成能力的检测在体外的细胞实验中CBD-VMP肽具有刺激HUVEC增殖的能力，故将各种肽加载到胶原蛋白支架上（如图1A），并皮下植入大鼠体内。植入后两周，肉眼可观察到：与对照组（PBS/collagen）和VMP/collagen组相比，CBD-VMP/collagen组（F=11.83，q=6.875，n=5，P<0.01）有更多的细胞浸润和血管形成（图4A），这些结果可被HE染色所证实（图4B,D）。此外，α-SMA是血管的特异性标志物，α-SMA的免疫染色表明支架内的新生血管形成是由VMP肽诱导的。并且与PBS/collagen组相比，VMP/collagen和CBD-VMP/collagen组（F=20.55，q=8.795，n=5，P<0.01）诱导的新生血管生成更显著。但是由于CBD的存在，CBD-VMP肽能特异性结合至胶原蛋白支架上，使更多的肽保留在支架中以提高肽的有效浓度，从而更有效的促进支架材料上血管新生（图4C,E）。
结果13图4.大鼠皮下移植CBD-VMP肽对血管生成的影响Fig.4EffectsofCBD-VMPpeptidescombiningcollagenscaffoldsonangiogenesisinasubcutaneouslytransplantedratmodel(A)Morphologyofscaffoldaftersubcutaneouslytransplantedinrat;(B)HEstainingofscaffolds；(C)Immunostainingofspecificmarkerofarterioleα-SMAinthescaffolds;(D)Numberofcellsinthescaffolds;(E)Numbersofarteriolesinthescaffolds.n=5ineachgroup.**P<0.01comparedwiththecontrolgroup.5.TTC染色法验证大鼠心肌梗死模型制备成功在制备大鼠心肌梗死模型过程中，用6-0丝线闭塞左冠状动脉前降支（leftanteriordescendingcoronaryartery,LAD）后，肉眼可见心脏左室壁明显变白或形成暗灰色。TTC染色结果如图5所示：红色部分为非梗死区，白色部分为心肌梗死区，证明大鼠心肌梗死模型制备成功。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Revascularization strategies for patients with myocardial infarction and multi-vessel disease: A critical appraisal of the current evidence[J]. Muhammad O Zaman,Mohammad K Mojadidi,Islam Y Elgendy. Journal of Geriatric Cardiology. 2019(09)
[2]生物材料治疗心肌梗死疾病的应用进展[J]. 任珊,蒋学俊. 心血管病学进展. 2013(06)
[3]组织和器官脱细胞方法的研究进展[J]. 陈博,彭代智. 中华损伤与修复杂志(电子版). 2012(06)
[4]分子生物学在组织工程学研究中的应用前景[J]. 郭晓东,杜靖远,郑启新,刘勇,段德宇. 中华实验外科杂志. 2001(03)
本文编号：3560465
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