缺血心肌靶向基因传递载体的研究

发布时间：2022-01-01 01:55

　　近年来，心血管疾病已经成为世界范围内发病率和死亡率最高的疾病之一。尽管基因治疗已经取得了令人满意的效果，但是安全有效的传递载体仍然是瓶颈所在。常用的心肌转运载体可分为病毒载体和非病毒载体。由于具有较高的转染效率，病毒载体的应用仍然具有绝对优势。但是，由于病毒载体引起的机体免疫反应较强，使其临床应用受到制约。作为病毒载体的有效补充，近年来非病毒载体的研究日益深入。本论文旨在构建特异靶向心肌细胞并具有较高转染效率和较低的细胞毒性的新型基因传递载体，为缺血性心脏病基因治疗的相关研究奠定基础。本论文设计构建了四种含有心肌特异性启动子的重组质粒：pGL3-α-MHC-Luc， pGL3-α-MHC-RFP及pGL3-epo-α-MHC-Luc、pGL3-epo-α-MHC-RFP并对其进行性质表征。分别在常氧、缺氧条件下，考察pGL3-epo-α-MHC-Luc和pCMV-Luc在H9C2中的表达水平，以评价缺氧特异性启动子的效果。分别在大鼠心肌细胞H9C2和对照细胞L929、C2C12、HELA中，定量分析重组质粒的虫荧光素酶（Luciferease）的表达，以评价启动子的心肌特异性。pGL3... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
第1章 前言
    1.1 缺血性心脏病
    1.2 治疗基因的选择
    1.3 传递载体的选择
        1.3.1 病毒载体
        1.3.2 非病毒载体
    1.4 基因表达的调控策略
        1.4.1 基因在靶组织特异性表达的调控
        1.4.2 基因在缺氧条件特异表达的调控
    1.5 立题依据及实验设计
        1.5.1 立题依据
        1.5.2 实验设计
第2章 材料与方法
    2.1 实验仪器、试剂与材料
        2.1.1 主要实验仪器
        2.1.2 主要实验试剂
        2.1.3 主要实验材料
    2.2 心肌靶向重组质粒的构建
        2.2.1 pGL3-epo-α-MHC-Luc 的构建
        2.2.2 pGL3-epo-α-MHC-RFP 的构建
        2.2.3 pGL3-α-MHC-Luc 的构建
        2.2.4 pGL3-α-MHC-RFP 的构建
    2.3 心肌靶向重组质粒的表征
        2.3.1 大鼠心肌细胞系的培养
        2.3.2 心肌靶向重组质粒的表达
        2.3.3 缺氧调控性质表征
        2.3.4 心肌特异性表征
    2.4 NLS 基因传递载体
        2.4.1 DNA/NLS 的制备及性质考察
        2.4.2 DNA/NLS/Lipo2000 的制备及优化
    2.5 LDH 基因传递载体
        2.5.1 LDH 的制备及优化
        2.5.2 LDH 的结构表征
        2.5.3 LDH 稳定性考察
        2.5.4 DNA/LDH 的制备及优化
第3章 结果与讨论
    3.1 心肌靶向重组质粒的构建
        3.1.1 pGL3-epo-α-MHC-Luc 的构建
        3.1.2 pGL3-epo-α-MHC-RFP 的构建
        3.1.3 pGL3-α-MHC-Luc 的构建
        3.1.4 pGL3-α-MHC-RFP 的构建
    3.2 心肌靶向重组质粒的表征
        3.2.1 心肌靶向重组质粒的表达
        3.2.2 缺氧调控性质表征
        3.2.3 心肌特异性表征
    3.3 NLS 基因传递载体
        3.3.1 DNA/NLS 的制备及性质考察
        3.3.2 DNA/NLS/Lipo2000 的制备及优化
    3.4 LDH 基因传递载体
        3.4.1 LDH 的制备及优化
        3.4.2 LDH 结构表征
        3.4.3 LDH 的稳定性考察
        3.4.4 DNA/LDH 的制备及优化
结论
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：3561424