中期因子对RAW264.7巨噬细胞ABCA1表达及胆固醇流出的影响

发布时间：2022-01-01 01:18

　　目的:中期因子（Midkine,MK）是一种肝素结合生长因子,研究表明,血清MK水平与动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）相关性的缺血性心血管疾病的发生发展密切相关,但其作用及具体机制尚不明确。因此,本研究的目的是探讨MK对巨噬细胞胆固醇流出的影响及其可能机制。方法:RAW264.7巨噬细胞用含有50 mg/L氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）的无血清培养基孵育48h,使其荷脂,分别进行以下实验:1.不同浓度（0,50,100,200,400ng/ml）的MK处理16 h或200 ng/m L浓度的MK处理不同时间（0,6,12,24,48 h）,采用油红O染色法及NBD-Cholesterol荧光标记法检测细胞内脂滴数量及胆固醇含量,液体闪烁计数（liquid scintillation counting,LSC）检测细胞胆固醇流出率及氧化酶法检测胞内脂质含量;细胞免疫荧光法、Western blot免疫印迹及实时定量PCR（Quantitative real time PCR,q RT-PCR）检测细胞... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ox-LDL致RAW264.7巨噬细胞脂质蓄积（10×40）

噬细胞16 h，采用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积情况，结果发现，与对照组比较，细胞体积增大，胞内脂滴增加，且胞内脂滴的含量随MK浓度的增加而逐渐增加（图2）。

图 2 油红 O 染色法观察不同浓度的 MK 处理对 RAW264.7 巨噬细胞胞内脂滴含量的影（10×40）用NBD-Cholesterol 孵育RAW264.7巨噬细胞后，荧光显微镜下观察胞内的强度，结果发现，与对照组相比，随着MK浓度的增加，胞内绿色荧光强渐增加（图3），提示胞内胆固醇的含量逐渐增加。这说明了MK促进RAW巨噬细胞脂质蓄积，且其效应具有浓度依赖性。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of AMPK in atherosclerosis via autophagy regulation[J]. Hanxiao Ou,Chuhao Liu,Wenjie Feng,Xinwen Xiao,Shengsong Tang,Zhongcheng Mo.  Science China（Life Sciences）. 2018(10)

博士论文
[1]红景天苷改善血管内皮功能及其抗动脉粥样硬化的作用与分子机制[D]. 邢莎莎.华中科技大学 2014

硕士论文
[1]二甲双胍通过P53-IFI16-AMPK通路抑制原代人主动脉平滑肌细胞的增殖和迁移[D]. 郝彪.贵州医科大学 2017



本文编号：3561370