冠心病患者单核细胞基因组总体甲基化水平及TLR4启动子甲基化水平研究

发布时间：2022-01-10 14:08

　　目的探讨冠心病患者外周血CD14+单核细胞基因组DNA总体甲基化水平以及特异基因TLR4（toll-like receptor4）启动子甲基化水平,为阐明冠心病患者外周血CD14+单核细胞的异常活化提供理论依据。方法密度梯度离心法和磁珠分选法分离20例冠心病患者和11例冠脉造影阴性对照的外周血CD14+单核细胞,抽提基因组DNA、总RNA和总蛋白,采用基因组总体甲基化定量试剂盒检测冠心病组和对照组DNA总体甲基化水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）检测甲基化相关基因包括DNA甲基转移酶（DNAmethyltransferases, DNMTs）和甲基结合蛋白2（methyl binding protein2, MBD2）以及TLR4的mRNA表达水平；Westem-blot检测TLR4的蛋白表达水平；亚硫酸氢钠测序检测TLR4基因启动子的甲基化水平；ELISA法检测血浆中炎症因子肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、IL-6及单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein1,MC... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
1 前言
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器设备、试剂及耗材
        2.1.2 其他常用试剂
        2.1.3 常用试剂配制
    2.2 方法
        2.2.1 CD14+单核细胞的分离
        2.2.2 酶联免疫吸附法ELISA检测血浆中炎症因子TNF-α、IL-6及MCP-1的水平
        2.2.3 RNA的抽提
        2.2.4 逆转录
        2.2.5 实时定量Realtime-PCR反应
        2.2.6 CD14+单核细胞基因组DNA提取及鉴定
        2.2.7 CD14+单核细胞基因组总体甲基化水平测定
        2.2.8 Westernblot检测TLR4蛋白水平的表达
        2.2.9 亚硫酸盐测序
    2.3 统计学方法
3 结果
    3.1 实验对象
    3.2 冠心病患者血浆炎症因子TNF-A、IL-6、MCP-1的表达水平
    3.3 冠心病患者外周血CD14+单核细胞基因组总体甲基化水平
    3.4 冠心病患者外周血CD14+单核细胞DNMTs及MBD2MRNA表达水平
    3.5 冠心病患者外周血CD14+单核细胞的总体甲基化与DNMTs和MBD2的相关性分析
    3.6 冠心病患者外周血CD14+单核细胞TLR4MRNA和蛋白表达
    3.7 冠心病患者外周血CD14+单核细胞TLR4启动子甲基化水平
    3.8 冠心病患者外周血CD14+单核细胞TLR4启动子甲基化水平与TLR4 MRNA表达的相关性分析
    3.9 冠心病患者外周血中CD14+单核细胞TLR4 MRNA表达和DNMT1MRNA表达的相关性分析
4 讨论
参考文献
附录
综述
    References
攻读学位期间学术成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA甲基化与动脉粥样硬化[J]. 贾镭,王晓建,惠汝太.  中国分子心脏病学杂志. 2011(03)
[2]Toll样受体4信号转导研究进展[J]. 张宇,孙瑞利,胡锦跃.  国际病理科学与临床杂志. 2009(01)



本文编号：3580847