论文一：RNA解旋酶DDX5通过抑制mRNA降解参与氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的巨噬细胞清道夫受体1（MSR1）

发布时间：2022-01-14 02:04

　　论文一:RNA解旋酶DDX5通过抑制mRNA降解参与氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的巨噬细胞清道夫受体1（MSR1）的表达研究背景和目的:动脉粥样硬化的标志性特征是单核细胞源性巨噬细胞进入血管内皮后吞噬脂质变成泡沫细胞。在斑块形成的最初阶段,巨噬细胞的吞噬作用有助于消除血管壁内的氧化低密度脂蛋白和凋亡细胞,但是在后期阶段巨噬细胞形成泡沫细胞,斑块增长、破裂,最终引起血栓形成。由此可见,研究分析巨噬细胞脂质吞噬过程是非常必要的。DDX5（the DEAD box protein 5）是ATP依赖的RNA解旋酶,通过调控转录在多种实体肿瘤性疾病中都发挥了重要调节作用。但是关于DDX5在心血管疾病中的作用知之甚少,所以这里我们主要探究DDX5是否参与巨噬细胞脂质吞噬过程,以及它调控这一过程的具体机制。研究方法:本研究中,我们首先通过对巨噬细胞给予时间梯度和浓度梯度的oxLDL刺激,检测DDX5总体表达情况的变化,观察DDX5在胞浆和胞核中的分布是否具有差异。其次,通过构建siRNA抑制巨噬细胞内DDX5的表达,研究DDX5对于巨噬细胞脂质吞噬的影响,探究其潜在的作用机制,即DDX5是否是... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：111 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１）??图１所示：ｏｘＬＤＬ刺激巨噬细胞内ＤＤＸ５表迗上升不依赖于ＭＡＰＫ和ＮＦ－ｋＢ信??号通路

？＃?ｗｖ，??（图２＞??图２所示：ＤＤＸ５部分通过调节ＭＳＲｌ的表达促进脂质吞噬。（Ａ左）对巨噬细胞给??予?ｓｉＲ－ＤＤＸ５（２ｐｌ?（ｓｉＲ－ＤＤＸ５－ｌ）或?５４?（ｓｉＲ－ＤＤＸ５－２））处理?２４?ｈ?后，通过?ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ??法检测ＤＤＸ５蛋白表达情况，ＧＡＰＤＨ作为内源性对照（＊ｐ＜０．０５ｖｓ．ＮＣ组）。（Ａ右）??将对照组和处理姐分别与低密度脂蛋白ｄｉｌ－ｏｘＬＤＬ孵育３０?ｍｉｎ后，用胞内低密度??脂蛋白荧光强度评价脂质摄取情况。（Ｂ）对巨噬细胞分别转染ＮＣ或ｓｉＲ－ＤＤＸ５（２＾１??（ｓｉＲ－ＤＤＸ５－ｌ）或?５ｎｌ（ｓｉＲ－ＤＤＸ５－２））?２４?ｈ?后再给予?ｏｘＬＤＬ（５〇ｎｇ?／ｍｌ）处理?２４?小时。然??后，提取细胞总ｍＲＮＡ，并逆转录。采用ｑＲＴ－ＰＣＲ检测与脂质吞噬相关的清道夫受??体?ＭＳＲｌ、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＳＣＡＲＢ１、ＳＲＣＬ、ＬＯＸ－１、ＣＸＣＬ１６、ＳＣＡＲＦ１?的表??２１??

组和ｓｉＲ－ＤＤＸ５＋ｏｘＬＤＬ组用转录抑制剂ＡｃｔＤ处理巨噬细胞，发现ｓｉＲ－??ＤＤＸ５＋ｏｘＬＤＬ?组中?ＭＳＲ１?ｍＲＮＡｔｌ／２?（半衰期）为?１．２ｈ，ｎｃ＋ｏｘＬＤＬ?组为?ｔｌ／２?（半??衰期）＞３．５ｈ（图３Ｃ）。说明ＤＤＸ５对维持ＭＳＲｌｍＲＮＡ的稳定性具有显著作用。接??着鉴于ＤＤＸ５对维持ＭＳＲ１的ｍＲＮＡ稳定性有积极作用，我们随后检测了?ＤＤＸ５??是否通过与内源性ＭＳＲ１?ｍＲＮＡ直接结合发挥作用。这里我们运用ＲＩＰ法发现??ｏｘＬＤＬ刺激后并不增力口?ＤＤＸ５和ＭＳＲｌｍＲＮＡ结合率（图３?Ｄ）。综上所述，这些结??果表明ＤＤＸ５不通过与ＭＳＲ１?ｍＲＮＡ直接结合，间接地对其稳定性发挥积极作用。??２４??


本文编号：3587589