TET2对apoE -/- 小鼠动脉粥样硬化病变的影响及其作用机制研究

发布时间：2022-01-14 06:38

　　TET2蛋白（ten-eleven-translocation 2）是一种DNA甲基化修饰酶,它是在进化上高度保守的TET（ten-eleven-translocation）家族成员之一,通过将5m C氧化为5hm C而发挥作用。研究在动脉斑块发生初期,DNA甲基化谱异常,表明斑块中自噬异常。本课题组前期研究表明,高脂饮食apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变中自噬障碍、TET2表达水平下调,推测TET2可能通过调节自噬途径从而发挥抗动脉粥样硬化作用。为证实该假说,本研究首先采用apo E-/-小鼠动物模型结合慢病毒转染技术,观察TET2过表达对apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变以及自噬的影响;在此基础上,通过质粒转染的方法观察TET2对HUVECs（Human umbilical vein endothelial cells）自噬及其潜在的分子机制。目的:探索TET2对apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变的影响及其可能潜在分子机制。方法:8周龄的雄性apo E-/-小鼠40只,适应性喂养一周后,随机分为两组:对照组、过表达TET2组,每组20只,分别尾静脉注射生理盐水及过表达TET2... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要缩略词中英文索引
第1章 绪论
    1.1 选题背景
    1.2 国内外研究现状
    1.3 研究目标、内容及拟解决的关键技术问题
        1.3.1 研究目标
        1.3.2 研究内容
        1.3.3 研究方法和可行性分析
        1.3.4 拟解决的关键问题和创新点
            1.3.4.1 拟解决的关键问题
            1.3.4.2 创新点
第2章 实验材料与研究方法
    2.1 实验材料与仪器
        2.1.1 实验所用动物、细胞和试剂
        2.1.2 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 动物模型的构建及实验分组
            2.2.1.1 动物饲养
            2.2.1.2 动物组织取材
        2.2.2 血浆血脂水平检测
        2.2.3 小鼠主动脉窦组织冰冻切片制作
        2.2.4 苏木素-伊红（HE）染色
        2.2.5 油红O染色
        2.2.6 细胞培养
            2.2.6.1 细胞复苏
            2.2.6.2 细胞传代
            2.2.6.3 细胞的冻存
        2.2.7 质粒提取
            2.2.7.1 大肠杆菌感受态细胞的制备
            2.2.7.2 质粒转化
            2.2.7.3 质粒提取
        2.2.8 质粒转染
        2.2.9 蛋白质免疫印迹
            2.2.9.1 蛋白质提取
            2.2.9.2 BCA法测定样品蛋白的含量
            2.2.9.3 聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳
            2.2.9.4 转膜
            2.2.9.5 封闭和抗体杂交
        2.2.10 免疫荧光染色
        2.2.11 亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)
            2.2.11.1 提取基因组DNA
            2.2.11.2 基因组DNA亚硫酸氢钠修饰
            2.2.11.3 PCR扩增以及产物的凝胶回收
                2.2.11.3.1 PCR扩增
                2.2.11.3.2 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳及回收
        2.2.12 统计学方法
第3章 实验结果
    3.1 APOE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块中TET2表达下调
    3.2 LV-TET2上调APOE~(-/-)小鼠主动脉TET2蛋白表达
    3.3 LV-TET2对APOE~(-/-)小鼠体重以及血脂水平的影响
    3.4 LV-TET2抑制APOE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化病变
    3.5 LV-TET2抑制APOE~(-/-)小鼠主动脉窦AS病变
    3.6 LV-TET2上调APOE~(-/-)小鼠主动脉窦AS病变处自噬
    3.7 TET2干预对OX-LDL处理的HUVECS TET2蛋白表达的影响
    3.8 TET2 干预对 ox-LDL 处理 HUVECs 自噬的影响
    3.9 TET2 干预对 HUVECs 自噬流的影响
    3.10 TET2抑制内皮细胞BECLIN1基因甲基化
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 不足与展望
参考文献
文献综述 TET2在动脉粥样硬化中的作用研究进展
    参考文献
作者攻读硕士学位期间的科研成果
致谢
基金资助


【参考文献】：
期刊论文
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[2]Autophagy in colorectal cancer:An important switch from physiology to pathology[J]. Florin Burada,Elena Raluca Nicoli,Marius Eugen Ciurea,Daniel Constantin Uscatu,Mihai Ioana,Dan Ionut Gheonea.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2015(11)
[3]细胞自噬与肿瘤的关系研究进展[J]. 杨晨,李萍,梁廷明.  生命科学. 2015(02)
[4]TET蛋白的去甲基化机制及其在调控小鼠发育过程中的作用[J]. 贾振伟,高树新,张永春,张显华.  遗传. 2015(01)
[5]表观遗传新标志物5hmC的研究进展[J]. 葛苗苗,蔡春.  生物化学与生物物理进展. 2014(09)
[6]TET2蛋白在恶性肿瘤中的调控因素研究进展[J]. 刘心玉,杨卫平,景晓乾.  中国药物与临床. 2014(03)



本文编号：3588009