AP0E -/- 小鼠TLR9介导巨噬细胞极化效应对动脉粥样硬化作用的研究

发布时间：2022-01-21 21:10

　　背景及目的:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）作为心血管疾病最常见的病理改变,目前认为其发生发展与免疫应答及伴随其发生的慢性炎症反应有关。Toll样受体（toll like receptors,TLRs）在天然免疫反应和获得性免疫反应中均具有重要作用,目前关于TLR9在AS发病机制中的作用还尚未明确。因此,本研究的目的是探讨TLR9是否可通过影响巨噬细胞的极化状态而影响AS的形成。方法:通过TLR9的拮抗剂（IRS869）和激动剂（ODN1826）刺激小鼠RAW264.7细胞,分为四组:对照组、ODN组、IRS组和ODN+IRS组。Apo E-/-小鼠分为两组,对照组（生理盐水组,saline,n=10）和干预组（IRS869组,n=10）,分别给予腹腔注射生理盐水（与干预组等体积）和IRS869（40μg）,每周两次,连续注射12周后处死小鼠。用Western blotting检测RAW264.7细胞各组TLR9的蛋白含量,及主动脉TLR9及其下游的分子My D88,p-NF-κB和IRF7的蛋白含量;用流式细胞术和免疫化学荧光检测RAW264.7细胞各组M1型和M... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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Abstract
前言
1 材料与方法
    1.1 实验细胞和动物
    1.2 实验设备
    1.3 实验主要试剂
    1.4 细胞培养分组及处理
    1.5 实验动物分组及处理
    1.6 Western blotting检测RAW264.7 细胞各组的TLR9蛋白含量
    1.7 Western blotting检测斑块TLR9及其下游分子的蛋白表达
    1.8 巨噬细胞表型的检测
    1.9 巨噬细胞相关炎症因子的检测
    1.10 主动脉根部油红O染色
    1.11 主动脉大体油红染色
    1.12 苦味酸天狼猩红染色
    1.13 免疫组化染色
    1.14 统计学分析
2 结果
    2.1 TLR9及其下游信号分子通路的蛋白表达情况
        2.1.1 RAW264.7 细胞TLR9蛋白表达水平的变化
        2.1.2 ApoE~(?/?)小鼠抑制TLR9后对斑块TLR9蛋白表达的影响
        2.1.3 ApoE~(?/?)小鼠抑制TLR9后对斑块TLR9下游分子蛋白表达的影响
    2.2 巨噬细胞极化状态的改变
        2.2.1 RAW264.7 细胞通过流式细胞术检测巨噬细胞(M1/M2型)的比例
        2.2.2 RAW264.7 细胞用免疫荧光双标化学染色检测iNOS和CD206蛋白的表达
        2.2.3 ApoE~(?/?) 小鼠通过免疫荧光检测主动脉斑块巨噬细胞表型的改变
    2.3 巨噬细胞（M1/M2）相关炎症因子的变化
        2.3.1 RAW264.7 细胞用RT‐PCR法和ELISA法检测TNF‐α 的表达
        2.3.2 ApoE~(?/?) 小鼠通过RT‐PCR检测各组动脉斑块巨噬细胞（M1 /M2型）相关炎症因子mRNA的表达
    2.4 抑制TLR9以后对动脉斑块面积及其易损性的影响
        2.4.1 通过油红O染色检测动脉斑块面积的变化
        2.4.2 抑制TLR9后对ApoE~(?/?) 小鼠动脉斑块易损性的影响
3 讨论
4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3600965