p300/p53/Smad3通路参与心房成纤维细胞衰老相关心房纤维化的研究
发布时间：2022-01-28 01:49
目的:心房颤动（Atrial fibrillation,AF）是一种“老年病”,其发病率随着年龄的增长而增加。纤维化是多种心血管疾病的共同病理过程,包括心房颤动,而衰老可参与纤维化的发生。既往研究显示辅转录激活因子p300在衰老和纤维化的病理过程中均起重要作用,因此本课题拟验证p300/p53/Smad3通路是否参与心房成纤维细胞衰老,进而导致心房衰老相关的心房纤维化,最终在AF的发生发展中起重要作用。探讨衰老在房颤病理发生过程中的潜在机制,为临床房颤的防治提供新的靶点及实验依据。方法:（1）收集不同年龄组（年轻组:18-49岁;年老组:≥50岁）的AF和窦性心律（Sinus rhythm,SR）患者的心房组织,运用Masson三原色染色和Western Blot实验方法检测各组的心房组织纤维化程度,p300和衰老相关信号通路p53/p21的蛋白表达,纤维化相关指标和信号通路III型和I型胶原蛋白（COL3A1/COL1A1）、基质金属蛋白酶2/9（MMP-2/9）、转化生长因子β1（TGF-β1）和Smad3/p-Smad3蛋白水平的表达变化。（2）建立自然衰老小鼠动物模型,Mass...
【文章来源】：华南理工大学广东省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同年龄SR/AF患者p300和衰老及纤维化相关信号通路蛋白表达水平Figure2-1Theproteinexpressionlevelsofp300/p53/Smad3inSR/AFpatientswithdifferentages.注：图示为SRyoung（18-49岁）、SRold（≥50岁）、AFyoung（18-49岁）、AFold（≥50岁）人心房组织p300，p53/p21，Smad3/p-Smad3蛋白表达水平的不同
第二章不同年龄SR/AF患者心房组织p300与衰老和纤维化相关19图2-2不同年龄SR/AF患者心房组织纤维化程度检测Figure2-2TheMassonstainingandtheexpressionleveloffibrosisassociatedproteinsinatrialtissuesofSR/AFpatientswithdifferentages.注：图示为SRyoung（18-49岁）、SRold（≥50岁）、AFyoung（18-49岁）、AFold（≥50岁）人心房组织纤维化相关蛋白表达水平的不同。以GAPDH为内参的定量统计结果，均数±标准误，n=7-8，*P<0.05vs.SRyoung，**P<0.01vs.SRyoung，#P<0.05vs.SRold，&P<0.05vs.AFyoung。
第三章自然衰老小鼠模型中p300与衰老和纤维化相关29recoverytime,SNRT）、小鼠右房不同刺激基础周长下的有效不应期（atrialmuscleeffectiverefractoryperiod,AERP）、房颤诱发率等指标，比较各组小鼠电生理参数差异。具体实验方法如下：（1）麻醉固定及体表心电图：按照上述3.3.5、3.3.6中实验方法操作。（2）颈内静脉置管：颈部备皮、消毒，做正中切口，钝性逐层分离出一侧颈内静脉，操作过程中实时监测小鼠呼吸心跳等生命体征、体表及腔内心电图，分离出的颈内静脉段，眼科剪剪一小口，逐步送入1.2F电极导管（4个环状电极，电极宽1mm，间距2mm）至右心房，结合腔内心电图显示大A波、小V波位确认心房位置后，固定电极导管，再逐步进行后续刺激实验。（3）SNRT：采用连续单刺激模式，设置刺激参数：基础周长为100ms、2倍有效心房夺获的起搏电压阈值为刺激幅度、脉宽1ms，连续起搏30ms。测量最后一次刺激和起搏结束后第一个小鼠自发心房除极恢复的时间即为SNRT。（4）AERP：采用程序刺激（S1S2刺激）模式，采用2倍有效心房夺获的起搏电压阈值为刺激幅度，脉宽2ms，在8个S1S1刺激的基础上加施一个S2期前刺激，S2以-2ms步长扫描。基础周长分别选择100ms、80ms和60ms，S2自70ms或60ms递减2ms直至心房不应。AERP定义为未能成功夺获心房的S1-S2间期最长者。（5）房颤诱发：采用Burst刺激方式起搏刺激心房，刺激周长设为20ms，脉宽1ms，输出电压6V，起搏刺激持续时间15s，重复10次。AF定义为心房无序的电活动，当体表心电图P波消失，代之以大小不一、形态不一、间隔不等的的f波，持续1s以上则被认为AF诱发成功。图3-1小鼠体表心电及经颈静脉在体心房起搏实验Figure3-1TheECGandtransvenouselectrophysiologicalstudyinC57BL/6mice3.4.8统计方法
【参考文献】：
期刊论文
[1]衰老与心肌纤维化[J]. 高小燕,邓春玉,饶芳. 医学综述. 2018(24)
[2]CREB-binding protein, p300, butyrate, and Wnt signaling in colorectal cancer[J]. Michael Bordonaro,Darina L Lazarova. World Journal of Gastroenterology. 2015(27)
本文编号：3613464
【文章来源】：华南理工大学广东省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同年龄SR/AF患者p300和衰老及纤维化相关信号通路蛋白表达水平Figure2-1Theproteinexpressionlevelsofp300/p53/Smad3inSR/AFpatientswithdifferentages.注：图示为SRyoung（18-49岁）、SRold（≥50岁）、AFyoung（18-49岁）、AFold（≥50岁）人心房组织p300，p53/p21，Smad3/p-Smad3蛋白表达水平的不同
第二章不同年龄SR/AF患者心房组织p300与衰老和纤维化相关19图2-2不同年龄SR/AF患者心房组织纤维化程度检测Figure2-2TheMassonstainingandtheexpressionleveloffibrosisassociatedproteinsinatrialtissuesofSR/AFpatientswithdifferentages.注：图示为SRyoung（18-49岁）、SRold（≥50岁）、AFyoung（18-49岁）、AFold（≥50岁）人心房组织纤维化相关蛋白表达水平的不同。以GAPDH为内参的定量统计结果，均数±标准误，n=7-8，*P<0.05vs.SRyoung，**P<0.01vs.SRyoung，#P<0.05vs.SRold，&P<0.05vs.AFyoung。
第三章自然衰老小鼠模型中p300与衰老和纤维化相关29recoverytime,SNRT）、小鼠右房不同刺激基础周长下的有效不应期（atrialmuscleeffectiverefractoryperiod,AERP）、房颤诱发率等指标，比较各组小鼠电生理参数差异。具体实验方法如下：（1）麻醉固定及体表心电图：按照上述3.3.5、3.3.6中实验方法操作。（2）颈内静脉置管：颈部备皮、消毒，做正中切口，钝性逐层分离出一侧颈内静脉，操作过程中实时监测小鼠呼吸心跳等生命体征、体表及腔内心电图，分离出的颈内静脉段，眼科剪剪一小口，逐步送入1.2F电极导管（4个环状电极，电极宽1mm，间距2mm）至右心房，结合腔内心电图显示大A波、小V波位确认心房位置后，固定电极导管，再逐步进行后续刺激实验。（3）SNRT：采用连续单刺激模式，设置刺激参数：基础周长为100ms、2倍有效心房夺获的起搏电压阈值为刺激幅度、脉宽1ms，连续起搏30ms。测量最后一次刺激和起搏结束后第一个小鼠自发心房除极恢复的时间即为SNRT。（4）AERP：采用程序刺激（S1S2刺激）模式，采用2倍有效心房夺获的起搏电压阈值为刺激幅度，脉宽2ms，在8个S1S1刺激的基础上加施一个S2期前刺激，S2以-2ms步长扫描。基础周长分别选择100ms、80ms和60ms，S2自70ms或60ms递减2ms直至心房不应。AERP定义为未能成功夺获心房的S1-S2间期最长者。（5）房颤诱发：采用Burst刺激方式起搏刺激心房，刺激周长设为20ms，脉宽1ms，输出电压6V，起搏刺激持续时间15s，重复10次。AF定义为心房无序的电活动，当体表心电图P波消失，代之以大小不一、形态不一、间隔不等的的f波，持续1s以上则被认为AF诱发成功。图3-1小鼠体表心电及经颈静脉在体心房起搏实验Figure3-1TheECGandtransvenouselectrophysiologicalstudyinC57BL/6mice3.4.8统计方法
【参考文献】：
期刊论文
[1]衰老与心肌纤维化[J]. 高小燕,邓春玉,饶芳. 医学综述. 2018(24)
[2]CREB-binding protein, p300, butyrate, and Wnt signaling in colorectal cancer[J]. Michael Bordonaro,Darina L Lazarova. World Journal of Gastroenterology. 2015(27)
本文编号：3613464
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