DAXX通过AR/SREBP-2信号通路下调HepG 2 细胞中胆固醇的合成

发布时间：2022-12-23 19:02

　　背景：高胆固醇血症是动脉粥样硬化斑块形成和发展的危险因子之一，雄激素受体作为胆固醇合成相关基因最重要的核转录调控因子，被证实很可能通过与死亡结构域相关蛋白相互结合而丧失转录激活功能，但其具体分子机制还有待进一步验证。 目的：为了证实在HepG2细胞中DAXX可以与AR相互结合并抑制其转录调控的胆固醇合成相关基因的转录。 方法：稳定转染pCDNA3.1（+）/DAXX至体外培养的HepG2细胞中，终浓度为1μmol/L的丙酸睾酮处理DAXX过表达的HepG2细胞24h，采用siRNA耗干扰竭内源性DAXX，采用免疫共沉淀法检测DAXX与AR的相互结合，应用油红O染色法、酶偶联比色法和高效液相法检测细胞中总胆固醇的含量，Western Blotting和RT-qPCR法检测AR、SREBP-2和HMGCR的表达水平。 结果：在HepG2细胞中DAXX和AR可以相互结合，但并不影响AR的转录表达；外源性DAXX过表达的HepG2细胞中总胆固醇的含量显著降低，胞内SREBP-2和HMGCR的表达明显被抑制；DAXX能够有效的阻遏丙酸睾酮对胆固醇合成的促进作用，并伴随着SREB... 

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
主要英文缩略语索引
摘要
ABSTRACT
引言
实验材料与试剂
    1. 主要实验仪器
    2. 主要实验耗材
    3. 主要材料与试剂
实验方法
    1. 实验主要溶液配制
    2. 质粒扩增与提取
    3. 细胞培养与稳定转染
    4. Western Blot
    5. 实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)
    6. 免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）
    7. 酶偶联比色法
    8. 高效液相色谱法
    9. 油红 O 染色
实验结果
    1. Western Blot 和 RT-PCR 鉴定稳定转染后 DAXX 的蛋白表达水平
    2. 免疫共沉淀法证实 DAXX 可以与 AR 相互结合
    3. 稳定转染 DAXX 后 HepG2细胞中胆固醇的含量下降
    4. 外源性 DAXX 高表达不会影响内源性 AR 的表达
    5. 过表达的外源性 DAXX 显著抑制 SREBP-2 的转录
    6. 过表达的外源性 DAXX 显著抑制 HMGCR 的转录
    7. AXX 能够阻断 TP 对 HepG2细胞胆固醇合成的激动作用
    8. TP 对 HepG2细胞中 AR 的蛋白表达没有明显影响
    9. DAXX 可以阻断 TP 上调 SREBP-2 的转录表达
    10. DAXX 可以阻断 TP 上调 HMGCR 的转录表达
    11. Western Blot 和 RT-PCR 鉴定瞬时转染 siRNA-DAXX 后胞内DAXX 的表达水平
    12.干扰内源性 DAXX 对 HepG2细胞中 AR 表达影响甚微
    13.干扰内源性 DAXX 后胞内 SREBP-2 的表达上调
    14.干扰内源性 DAXX 后 HMGCR 的表达上调
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
发表文章
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Daxx与雄激素受体结合的功能片段筛选[J]. 庹勤慧,徐桂娜,郭琰,朱炳阳,廖端芳.  中国动脉硬化杂志. 2010(12)
[2]Daxx通过上调caveolin-1的表达介导Ox-LDL诱导巨噬细胞胆固醇蓄积和凋亡（英文）[J]. 贺庆芝,庹勤慧,曾怀才,朱炳阳,让蔚清,唐小卿,廖端芳.  生物化学与生物物理进展. 2010(08)
[3]Daxx过表达对氧化应激诱导的肝肿瘤细胞凋亡的影响（英文）[J]. 庹勤慧,熊国祚,朱炳阳,曹建国,廖端芳.  生物化学与生物物理进展. 2008(11)



本文编号：3725258