转录因子SP1调控血管平滑肌细胞表型转化在主动脉夹层发生中的作用

发布时间：2017-06-13 23:02

  本文关键词：转录因子SP1调控血管平滑肌细胞表型转化在主动脉夹层发生中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的:通过对人体主动脉夹层病理组织、SD大鼠主动脉夹层动物模型组织及体外培养的血管平滑肌细胞的相关研究,了解转录因子SP1与主动脉夹层组织中血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的相关性,探索其在主动脉夹层发生的中的作用。研究方法:本研究主要包括三部分内容:第一部分:收集人主动脉夹层病理组织(10例)及正常主动脉组织(4例),通过Western-Blot、RT-PCR检测上述组织中的转录因子SP1及收缩型血管平滑肌细胞的表型标志物SM22α的表达水平,并进行相关性分析。第二部分:建立SD大鼠主动脉夹层动物模型,该部分实验采用20只3周龄雄性SD大鼠,随机分为两组,第一组为正常对照组(10只),饮用水为一般矿物质水;第二组为实验组(10只),饮用水为0.25%β-氨基丙腈(BAPN)水溶液。每2-3天测量一次大鼠的体重并记录大鼠的一般状况。中途死亡的大鼠,及时进行解剖留取主动脉全程;至实验第4周末仍存活的大鼠,予断颈处死后解剖留取主动脉全程。对主动脉标本行HE、VB染色及透射电镜观察,从病理及形态学鉴定主动脉夹层发生情况。Western-Blot及RT-PCR,检测SP1及SM22α表达情况,并进行相关性分析;免疫组织化学染色,定位SP1在主动脉夹层组织中的主要表达位置。第三部分:体外培养正常人主动脉平滑肌细胞,构建SP1过表达腺病毒,转染VSMC过表达其中的SP1,Western-Blot及RT-PCR检测SM22α的表达情况,从而在细胞水平验证SP1与VSMC表型转化的相关性。研究结果:第一部分实验中,夹层组织中的SP1表达量较对照组有所增加,而SM22α较对照组显著降低,相关性分析提示SP1与SM22α呈负相关。第二部分实验中,经标本的HE、VB染色以及透射电镜观察确认,SD大鼠主动脉夹层模型构建成功,主动脉夹层发生率100%,主动脉夹层破裂比例100%;正常对照组的大鼠生长良好,无主动脉夹层发生,无死亡。值得注意的是,实验组大鼠发生的主动脉夹层均在胸主动脉段,提示该建模方式简单高效,满足实验所需。标本的Western-Blot及RT-PCR结果与人体标本结果相一致,统计学数据显示SP1与SM22α呈负相关。免疫组织化学染色结果显示:SP1主要分布于主动脉壁的血管平滑肌细胞,且主要定位在细胞核位置,SP1在实验组中的表达较正常对照组增加,临近主动脉夹层破口处SP1染色尤为明显。第三部分实验中:所构建的SP1过表达腺病毒能够高效转染体外培养的VSMC并成功过表达其内的SP1。且在过表达SP1之后,VSMC中收缩型表型标志物SM22α有所减少,提示VSMC收缩型减少,发生了表型转化。结论:人体主动脉夹层组织、动物主动脉夹层模型组织中的研究,证实在夹层组织中SP1表达上调,VSMC发生了表型转化,两者具有相关性;体外细胞实验过表达SP1能够引发VSMC表型转化。提示转录因子SP1可能通过促进VSMC表型转化,参与到主动脉夹层的发生过程。
【关键词】：主动脉夹层 动物模型 SP1 血管平滑肌细胞 表型转化
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.1
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词表9-10
• 前言10-13
• 参考文献11-13
• 第一部分 人主动脉壁组织中SP1与VSMC表型转化相关性分析13-25
• 一、材料和方法13-20
• 二、结果20-22
• 三、讨论22-23
• 参考文献23-25
• 第二部分 SD大鼠主动脉夹层模型组织中SP1与VSMC表型转化的关系25-50
• 一、材料和方法25-38
• 二、结果38-46
• 三、讨论46-48
• 参考文献48-50
• 第三部分 过表达SP1后VSMC表型转化情况50-68
• 一、材料和方法50-62
• 二、结果62-65
• 三、讨论65-66
• 参考文献66-68
• 综述 自噬在血管平滑肌细胞表型转化中作用的研究进展68-78
• 参考文献73-78
• 致谢78

【参考文献】

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本文编号：447793