滤泡辅助T细胞在骨髓增生异常综合征发病机制中作用的研究

发布时间：2017-06-23 16:11

  本文关键词：滤泡辅助T细胞在骨髓增生异常综合征发病机制中作用的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过研究骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic syndromes,MDS)小鼠模型(NUP98-HOXD13转基因小鼠)外周血象及骨髓象变化、脾脏和骨髓滤泡辅助T细胞(Follicular helper T cells,Tfh)数量及其表面诱导性共刺激分子(ICOS)、程序化死亡分子-1(PD-1)、CD40L、OX40的表达情况,以探讨其在MDS发病机制中的作用,进一步阐明机体免疫耐受及免疫监视功能在骨髓增生异常综合征发生、发展过程中的具体机制,为骨髓增生异常综合征的免疫靶向治疗提供理论依据。方法实验对象MDS小鼠模型即NUP98-HOXD13转基因小鼠(NHD13小鼠)(Strain Name:C57BL/6-Tg(Vav-NUP98/HOXD13);Stock Number:010505)购自美国Jackson实验室,对照选用同源野生型C57BL/6J小鼠。实验组及对照组各5-10只,雄性,6-8周龄。饲养地点为中国医学科学院放射医学研究所动物中心,饲养环境符合SPF级别。第一部分观察NHD13小鼠外周血象及骨髓象变化。分别选取13只雄性NHD13小鼠及8只与其同源的野生型C57BL/6J小鼠作为实验对象,使用全血细胞自动分析仪对其进行外周血细胞计数,外周血及骨髓细胞涂片经瑞氏染色后显微镜下观察细胞形态。第二部分观察NHD13小鼠脾脏淋巴滤泡结构等病理变化,并用免疫组化方法检测5只NHD13小鼠和5只野生型小鼠脾脏细胞表面CXCR5的表达情况。第三部分研究NHD13小鼠脾脏及骨髓来源滤泡辅助T细胞数量及其表面分子ICOS、PD-1、CD40L、OX40的表达情况。分别选取10只雄性NHD13小鼠及其同源的野生型C57BL/6J小鼠作为实验对象,用流式细胞术分别检测脾脏及骨髓来源滤泡辅助T细胞数量及其表面分子ICOS、PD-1、CD40L、OX40的表达情况。第四部分研究NHD13小鼠脾脏来源细胞及骨髓单个核细胞内ICOS、PD-1、CD40L、OX40 mRNA的表达。用实时定量PCR方法分别检测8只NHD13小鼠及其同源的野生型c57bl/6j小鼠骨髓单个核细胞、脾脏来源细胞icos、pd-1、cd40l、ox40mrna的表达。结果第一部分nhd13小鼠外周血白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、红细胞、血红蛋白、血小板数量均明显低于野生型小鼠,且差异具有显著性(p0.05)。nhd13小鼠红细胞及血小板体积较野生型小鼠明显增大,差异具有显著性(p0.05),nhd13小鼠表现为大细胞性贫血。nhd13小鼠红细胞分布宽度及血小板分布宽度均较野生型小鼠明显增大,二者差异具有显著性(p0.05);与野生型小鼠相比,nhd13小鼠的红细胞及血小板相对大小不均。nhd13小鼠外周血涂片显示白细胞数量、红细胞数量和血小板数量均较野生型小鼠减少。转基因小鼠红细胞体积明显增大。转基因小鼠骨髓中可见双核红细胞、环状核粒细胞和红系造血岛等。第二部分与野生型小鼠相比,nhd13小鼠脾脏内淋巴滤泡及生发中心均明显减少,红髓增宽。免疫组化结果显示nhd13小鼠脾脏细胞表面cxcr5的表达明显低于野生型小鼠,而pd-1的表达明显增高。第三部分nhd13小鼠脾脏来源tfh细胞数量明显少于野生型小鼠(p0.05),其表面分子icos、cd40l、ox40的表达均明显低于野生型小鼠(p0.05),pd-1的表达明显高于野生型小鼠(p0.05)。nhd13小鼠骨髓来源tfh细胞数量明显少于野生型小鼠(p0.05),其表面分子ox40的表达均明显低于野生型小鼠(p0.05),pd-1的表达明显高于野生型小鼠(p0.05),icos及cd40l的表达在二者之间无明显差异(p0.05)。第四部分nhd13小鼠脾脏细胞内icos、cd40lmrna的表达明显低于野生型小鼠,差异具有显著性(p0.05)。nhd13小鼠脾脏细胞内pd-1mrna的表达明显高于野生型小鼠,差异具有显著性(p0.05)。nhd13小鼠与野生型小鼠脾脏细胞内ox40mrna的表达无明显区别(p0.05)。nhd13小鼠骨髓单个核细胞内icos、cd40l、ox40mrna的表达明显低于野生型小鼠,差异具有显著性(p0.05)。nhd13小鼠骨髓单个核细胞内pd-1mrna的表达明显高于野生型小鼠,差异具有显著性(p0.05)。结论1、nhd13小鼠外周血三系血细胞均明显低于野生型小鼠,且红细胞、血小板体积偏大,且与野生型小鼠相比,其红细胞及血小板的体积相对大小不均;NHD13小鼠骨髓中可见双核红细胞、环状核粒细胞、粒红系造血岛等异常。2、NHD13小鼠脾脏内淋巴滤泡及生发中心均明显减少,红髓增宽,即免疫相关的功能性结构较少;免疫组化结果显示NHD13小鼠脾脏细胞表面CXCR5的表达明显降低,说明脾脏内CXCR5+T细胞数量减少,而且免疫抑制性分子PD-1的表达升高,由此可推断脾脏免疫功能降低。3、NHD13小鼠脾脏来源Tfh细胞数量减少,其表面免疫共刺激分子ICOS、CD40L、OX40的表达减低,免疫抑制分子PD-1的表达明显升高;NHD13小鼠骨髓来源Tfh细胞数量减少,其表面免疫共刺激分子OX40的表达减低,免疫抑制分子PD-1的表达升高。与野生型小鼠相比,NHD13小鼠免疫功能低下,免疫耐受功能及免疫监视功能减弱,造成恶性克隆增生。
【关键词】：骨髓增生异常综合征 滤泡辅助性T细胞 诱导性共刺激分子 程序化死亡分子-1
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R551.3
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 缩略语/符号说明12-14
• 前言14-18
• 研究现状、成果14-16
• 研究目的、方法16-18
• 1.对象和方法18-26
• 2.结果26-48
• 3.讨论48-53
• 结论53-54
• 参考文献54-58
• 发表论文及参加科研情况58-59
• 综述59-76
• 综述参考文献70-76
• 致谢76-77

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本文编号：475610