骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞自噬水平的研究

发布时间：2017-06-23 14:08

  本文关键词：骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞自噬水平的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓单个核细胞Beclin1、哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)、微管相关蛋白轻链3(LC3)水平,初步探讨MDS患者骨髓原代细胞自噬水平的改变。材料与方法38例MDS患者为实验组(MDS组),26例非恶性贫血患者为对照组。骨髓细胞铁染色检测骨髓细胞内、外铁含量和环形铁粒幼细胞;流式细胞仪检测骨髓单个核细胞活性氧(ROS)水平;透射电镜观察骨髓单个核细胞内自噬泡数量;丹(磺)酰戊二胺(MDC)法检测骨髓单个核细胞自噬泡水平;免疫荧光法观察观察骨髓单个核细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白表达,qPCR法检测自噬相关基因Beclin1、LC3、mTOR mRNA表达,Western blottiing检测Beclin1、LC3蛋白的表达。结果(1)骨髓细胞铁染色发现MDS患者细胞外铁、细胞内铁和环形铁粒幼细胞数量均较对照组增加。(2)流式细胞术检测到MDS组(n=7)患者骨髓单个核细胞ROS水平(1352.41±667.51)高于对照组ROS水平(n=5,596.46±233.99,P0.05)。(3)透射电镜观察到MDS患者骨髓细胞内存在双层膜结构自噬泡,内含溶酶体。(4)MDC染色发现MDS组(n=4)染色阳性(自噬泡)细胞数目比例(9.75%±2.63%)显著高于对照组(n=5,2.90%±0.89%,P0.05)。(5)免疫荧光法观察到MDS组(n=4)LC3阳性细胞数目比例(6.13%±1.03%)显著高于对照组(n=4,1.5%±0.58%,P0.05)。(6)qPCR法检测到低危/中危-1 MDS组(n=14)骨髓单个核细胞Beclin1mRNA表达水平(3.61±3.02)显著高于对照组(n=11,1.55±1.03,P0.05);中危-2/高危MDS组(n=8)Beclin1 mRNA表达水平为2.63±2.79,高于对照组,但没有统计学差异,P0.05;低危/中危-1MDS组(n=10)骨髓单个核细胞LC3A mRNA水平(6.56±3.97)显著高于对照组(n=7,1.21±0.95,P0.05);低危/中危-1MDS组(n=9)骨髓单个核细胞的自噬负性调控基因mTOR mRNA水平(0.39±0.37)显著低于于对照组(n=9,1.50±1.03,P0.05);中危-2/高危MDS组(n=4)mTOR mRNA表达水平为1.73±1.69,高于对照组,但没有统计学差异,P0.05。(7)Western blotting发现Beclin1、LC3蛋白表达MDS组高于对照组。结论MDS患者ROS水平升高,低危/中危-1MDS组患者较对照组骨髓单个核细胞自噬水平升高,中危-2/高危MDS组患者较对照组骨髓单个核自噬水平无明显改变,提示自噬对MDS患者细胞可能起保护性作用,自噬水平相对不足可能与患者高危险性向AML转化相关。
【关键词】：骨髓增生异常综合征 活性氧 自噬 急性髓系白血病
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R551.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-15
• 研究目的、方法13-15
• 第一部分：MDS 患者骨髓单个核细胞铁含量及 ROS 水平变化15-21
• 1.1 对象和方法15-17
• 1.1.1 研究对象15
• 1.1.2 主要试剂和材料15-16
• 1.1.3 实验方法16-17
• 1.1.4 统计学分析17
• 1.2 结果17-18
• 1.2.1 MDS患者骨髓细胞铁含量检测17
• 1.2.2 MDS患者骨髓单个核细胞内活性氧水平17-18
• 讨论18-20
• 小结20-21
• 第二部分 MDS 患者骨髓单个核细胞自噬泡数量的改变21-38
• 2.1 对象与方法21-31
• 2.1.1 研究对象21
• 2.1.2 主要试剂与仪器21-26
• 2.1.3 实验方法26-31
• 2.1.4 统计学分析31
• 2.2 结果31-35
• 2.2.1 透射电镜观察 MDS 患者骨髓细胞自噬泡31-32
• 2.2.2 MDC 染色观察 MDS 患者骨髓单个核细胞中自噬泡32-33
• 2.2.3 免疫荧光法观察细胞中 LC3 蛋白的表达33-34
• 2.2.4 qPCR 方法检测细胞自噬相关基因表达34-35
• 2.2.5 Western blotting 检测各组细胞自噬相关蛋白表达35
• 讨论35-37
• 小结37-38
• 第三部分：MDS 患者骨髓单个核细胞自噬水平的研究38-51
• 3.1 研究对象和方法38-46
• 3.1.1 研究对象38
• 3.1.2 主要试剂与仪器38-42
• 3.1.3 研究方法42-46
• 3.1.4 统计学分析46
• 3.2 结果46-48
• 3.2.1 qPCR 方法检测细胞自噬相关基因表达46-47
• 3.2.3 Western blotting 检测各组细胞自噬相关蛋白表达47-48
• 讨论48-50
• 小结50-51
• 全文结论51-53
• 参考文献53-62
• 发表论文和参加科研情况说明62-63
• 综述63-73
• 参考文献67-73
• 致谢73

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本文编号：475270