直接接触共培养诱导骨髓间充质干细胞定向分化的研究
本文关键词：直接接触共培养诱导骨髓间充质干细胞定向分化的研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的：应用SD大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells, BM-MSC)与乳鼠心肌细胞(cardiomyocytes, CMs)在体外直接接触共培养的方法,研究BM-MSC向CMs的分化情况及心肌样细胞特异性标记物的表达。方法：取四周龄SD大鼠,分离、培养骨髓间充质干细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,用流式细胞仪鉴定BM-MSC表面抗原CD29、CD45、CD44、CD90、CDllb,用细胞诱导剂诱导BM-MSC向成骨、成软骨、成脂方向分化。取出生1-2天乳鼠,分离培养心肌细胞,用免疫荧光法鉴定心肌细胞标志物cTnT、cTnI、α-actin。用DAPI标记BM-MSC,与乳鼠心肌细胞直接接触共培养分化为心肌样细胞,检测心肌特异性蛋白的表达。结果：原代SD大鼠BM-MSC体外培养的形态学特点：原代BMMSCs形态多样,以纺锤形、圆形、短梭形以及多角形等最为多见,细胞有聚集生长的趋向,多个细胞形成一个集落。细胞传代后体积变大,形态较均一,以成纤维细胞样多见,长梭形,细胞均一度较高,碎片或杂细胞数目也减少。分析细胞周期结果显示BM-MSC约15%处于活跃的复制期,其余绝大部分细胞停滞在GO/G1(84.9%),即说明大部分细胞具有高度分化的潜能。采用流式细胞仪检测BM-MSC表面特异性抗原CD44、CD29、CD90表达阳性,表面抗原CD45、CDllb表达阴性。直接接触共培养的BM-MSC表达心肌特异性肌钙蛋白T和心肌特异性肌钙蛋白I及a-actin,其中a-actin的阳性表达率最高,CTnT次之,CTnI的阳性表达率最低。结论：骨髓间充质干细胞在与心肌细胞直接接触共培养条件下,BM-MSC可分化为心肌样细胞,并且能表达心肌特异性肌钙蛋白T和心肌特异性肌钙蛋白I及a-actin。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 直接接触 共培养 分化 心肌细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照5-6
- 中文摘要6-8
- 英文摘要8-11
- 前言11-13
- 1 材料与方法13-18
- 2 结果18-20
- 3 讨论20-24
- 结论24-25
- 参考文献25-29
- 附图29-35
- 文献综述35-43
- 参考文献40-43
- 致谢43-44
- 攻读学位期间发表的学术论文44
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