PR39与ADM共载体rAAV分泌表达后对心肌缺血再灌注损伤的保护性研究

发布时间：2017-07-07 17:02

  本文关键词：PR39与ADM共载体rAAV分泌表达后对心肌缺血再灌注损伤的保护性研究

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【摘要】：目的:探讨共载体r AAV-PR39-ADM分泌表达促血管生成因子(PR39)和血管扩张因子(ADM)对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。本实验首先制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,然后将共载体r AAV-PR39-ADM注射在缺血心肌区域,通过B超、血流动力学等检测指标对缺血心肌功能进行评价,最后通过分子生物学手段检测给药区域心肌下游相关因子表达情况。方法:[1]实验一:选健康成年雄性SD大鼠36只,体重范围在280g±20g,随机分为对照组(I/RSaline)、治疗1(TR1)、治疗2(TR2),每组各12只。实验二:选健康成年雄性SD大鼠48只,体重范围在280g±20g,随机分为治疗组1(TR1)、治疗组2(TR2)、对照组1(CG1)、对照组2(CG2),每组各12只。[2]各组大鼠首先建立心肌缺血再灌注损伤模型。实验一,对照组将0.3ml生理盐水通过鼠尾静脉注射;TR1组将0.3ml r AAV-PR39-ADM(3×109pfu)通过鼠尾静脉注射;TR2组将r AAV-PR39-ADM 0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部。实验二,TR1组,将共载体r AAV-PR39-ADM0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部;TR2组,将共载体r AAV-PR39 0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部;CG1组,将腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部;CG2组,将生理盐水0.3ml注射在缺血再灌注损伤心肌局部。3.使用心电图对模型进行监测,术后7天分别使用TTC染色、心肌称重实验、血流动力学等手段评价模型及给药方式;利用B超和血流动力学评价四组大鼠心功能,病理切片用masson染色对心肌梗死纤维化面积(MIA)评价分析。4.速取心肌组织进行研磨,提取蛋白,用western blot方法检测相关因子表达。结果:[3]TTC染色大鼠心肌缺血再灌注损伤确切,证明模型制备成功。[4]心肌局部给药优于外周给药。3.实验2:各组大鼠术后7天行B超检查,测量左室壁厚度及计算左心室射血分数(EF%);血流动力学检测,左室收缩末压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、左室内压最大上升及下降速率(±LV dp/dt max),评价心脏功能;病理切片评价心肌梗死面积。TR1组EF%、LVSP、±LV dp/dt max各项指标明显高于TR2、CG1、CG2组;TR2组EF%、LVSP、±dp/dt max高于CG1、CG2组;而CG1、CG2组EF%、LVSP、±LV dp/dt max无统计学差异。TR1、TR2组梗死面积小于CG1、CG2组;而TR1组梗死面积小于TR2组;CG1、CG2组梗死面积无差异。4.在缺血心肌蛋白中,成功检测到下游低氧诱导因子(HIF-1α)、PR39标签肽(6His)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管扩张因子(ADM)的表达,并对其含量进行分析,TR组高于CG组。结论:1.SD大鼠心肌缺血再灌注损伤模型复制成功。2.治疗组缺血心肌功能得以提高,心肌收缩功能改善,梗死面积有所减小,共载体r AAV-PR39-ADM可能提高了大鼠缺血心肌的功能。3.心功能改善的机制可能与共载体r AAV-PR39-ADM高表达扩血管因子(ADM)和下游血管内皮生长因子(VEGF)有关。
【关键词】：血管生成因子(PR39) 血管扩张肽(ADM) 心肌缺血再灌注 基因治疗
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.2
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 文献回顾14-28
• 实验一 SD大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的制备及给药28-40
• 1 材料28-29
• 2 实验设计及目的29
• 3 实验方法29-32
• 3.1 心肌缺血再灌注损伤模型的制备29-30
• 3.2 给药实验30
• 3.3 血流动力学实验30-31
• 3.4 心肌称重实验31
• 3.5 2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色实验31
• 3.6 统计分析31-32
• 4 实验结果32-34
• 5 讨论34-40
• 实验二 评价共载体rAAV-PR39-ADM治疗SD大鼠缺血心肌的疗效40-60
• 1 材料40-45
• 2 实验设计及目的45
• 3 实验方法45-52
• 3.1 模型制备及给药实验45
• 3.2 B超检测实验45-46
• 3.3 血流动力学检测实验46
• 3.4 心肌病理切片染色实验46
• 3.5 western blot方法检测实验46-52
• 3.6 数据统计分析52
• 4 实验结果52-57
• 5 讨论57-60
• 小结60-61
• 参考文献61-71
• 附录71-72
• 个人简历和研究成果72-73
• 致谢73-74

【参考文献】

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1 杨洁;杜德伟;李占亭;贾林涛;赵晶;许彦鸣;杨安钢;孙脊峰;;HRE/CMV启动子的克隆和缺氧调控活性的测定[J];中国病理生理杂志;2007年12期

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本文编号：531011