血浆microRNAs预测氯吡格雷抗血小板疗效及心血管不良事件的研究

发布时间：2017-08-04 19:35

  本文关键词：血浆microRNAs预测氯吡格雷抗血小板疗效及心血管不良事件的研究

  更多相关文章： 血浆miRNA 氯吡格雷 miR-142 抗血小板治疗 冠心病

【摘要】：目的:血浆中存在稳定的并可以反映血小板被激活情况的特异性microRNAs,具备作为冠心病等疾病的生物标记物潜能。我们前期研究也发现,血浆miR-126可能是潜在的预测经皮冠状动脉介入治疗PCI术后冠心病患者心脏主要不良事件的生物标记物。本课题旨在通过对氯吡格雷药动学/药效学实验寻找与氯吡格雷药物效应有关的miRN As,用miRNAs对PCI术后冠心病患者服用氯吡格雷后在随访期内,发生主要不良心血管事件MACE的风险率和次要终点出血事件发生率进行预测评估,探讨血浆循环miRNAs是否可以作为评估氯吡格雷抗血小板疗效个体差异的生物标记物。方法:(1)筛选与氯吡格雷药效有关的miRNAs:首先设计系列预实验来建立、优化血浆miRNA提取和定量检测的方法;入选诊断为冠心病的患者153例,服用氯吡格雷首剂300 mg负荷剂量以及阿司匹林100 mg后,用VerifyNow抗血小板治疗监测系统检测血小板集聚率ARU、PRU,根据检测结果分组并组成血浆样本池,提取血浆总RNA;运用illumina高通量测序检测并筛选在组间差异表达的miRN As;然后基于特异性茎环引物qRT-PCR方法,验证和筛选的这些miRNAs在样本池间的表达;同时也通过qRT-PCR方法在每个单独患者血浆样本间检测筛选到的miRNAs表达水平,用Spearman相关分析方法统计血浆循环miRNAs与氯吡格雷药效学(血小板聚集率PRU)的相关性;(2)用所筛选miRNAs预测氯吡格雷药动学效应:入选另一诊断为冠心病的人群31例,服用氯吡格雷首剂300 mg负荷剂量以及阿司匹林100 mg,进行氯吡格雷药代动力学考察以及服药前血浆miRNAs检测,分析miRNAs表达水平与氯吡格雷活性代谢产物MP-H4药代动力学PK参数(Cmax、AUC0-4h、Tmax)的相关性与预测性;(3)在前瞻性队列验证miRNAs与心血管不良事件的影响:入选诊断为冠心病,并且服用氯吡格雷联合阿司匹林抗血小板治疗的患者1230例,作为独立的前瞻性研究队列,进行为期三年的随访调查,同时采集患者入院后服药前的血浆,检测所筛选到的mirnas的表达水平,运用cox回归或logistic回归模型分析临床基线特征资料和血浆mirnas表达水平分别与患者随访期内发生主要终点mace事件和次要终点出血事件风险的关系,筛选能够预测氯吡格雷抗血小板疗效个体差异的中间指标。结果:(1)本实验建立和优化的对血浆mirnas定量分析的qrt-pcr方法有效可行。通过illumina建库测序检测筛选到17个在组间差异表达的mirnas。其中,在血浆样本池间验证得到与测序结果相一致的有6个mirnas(mir-126、mir-130a、mir-27a、mir-106a、mir-21、mir-142)。并且,这6个血浆mirnas中mir-126、mir-130a、mir-27a、mir-142在氯吡格雷抵抗人群中表达上调(p0.05)。在发生阿司匹林抵抗时,mir-126、mir-130a、mir-142、mir-21和mir-27a在氯吡格雷抗抵抗人群中表达显著升高(p0.05)。(2)在氯吡格雷药代动力学研究中,运用错误控制方法fdr对p值进行多重检验校正后发现,患者服药前血浆mir-142的表达水平与mp-h4cmax和auc0-4h显著负性相关(p0.05)。(3)在前瞻性队列研究中,较高的mir-142和mir-126的表达水平与该患者接受氯吡格雷抗血小板治疗后mace事件高发生率显著相关(p值分别为0.0006、0.0353)。多因素cox回归分析显示,血浆mir-142表达水平、合并疾病糖尿病、心衰以及使用钙离子通道拮抗剂是患者在氯吡格雷用药后随访期内发生mace风险率的独立影响因素(p值均0.05)。另外,血浆mir-21、mir-27a、mir-106a、mir-126、mir-130a和mir-142的表达水平,与患者服用氯吡格雷后在随访期内发生或不发生出血事件无明显关联性。结论:血浆mir-126、mir-130a、mir-142、mir-21和mir-27a可能是反映氯吡格雷抗血小板药物效应的潜在中间指标。在pci术后服用氯吡格雷的冠心病患者中,血浆mir-142表达水平与糖尿病、心衰和合并使用钙离子通道阻滞剂都是引起mace的独立风险因素。基于对miR-142与氯吡格雷药动/药效学的相关研究证明,血浆miR-142可以作为评估其抗血小板药物效应个体差异以及预测临床终点事件的生物标记物。
【关键词】：血浆miRNA 氯吡格雷 miR-142 抗血小板治疗 冠心病
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R541.4
【目录】：

• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 序言13-16
• 第一章 血浆循环miRNAs定量技术的建立与优化16-31
• 1.1 引言16
• 1.2 材料与方法16-22
• 1.2.1 仪器与设备16-17
• 1.2.2 药品与试剂17-18
• 1.2.3 样品采集与处理18
• 1.2.4 血浆总RNA提取纯化18-20
• 1.2.5 RNA浓度及纯度检测20
• 1.2.6 miRN A茎环法逆转录为cDN A20-21
• 1.2.7 实时荧光定量PCR21-22
• 1.2.8 外参cel-miR-39 c DNA浓度梯度稀释检测22
• 1.3 结果22-29
• 1.3.1 血浆总RNA浓度检测结果22-23
• 1.3.2 血浆miRN A和外参cel- miR-39的表达情况23-27
• 1.3.3 外参cel-miR-39 c DNA浓度梯度稀释标准曲线27-29
• 1.4 讨论29-30
• 1.5 结论30-31
• 第二章 血浆miRNAs与氯吡格雷药效学（PD）的相关性研究31-51
• 2.1 引言31-32
• 2.2 研究对象32-33
• 2.2.1 病例入选32
• 2.2.2 病例临床基线资料录入32
• 2.2.3 病例分组与研究方案32-33
• 2.2.4 药效定义33
• 2.3 材料与方法33-38
• 2.3.1 仪器与设备33-34
• 2.3.2 药品与试剂34-35
• 2.3.3 样品收集处理35
• 2.3.4 检测氯吡格雷及活性代谢产物MP-H4血药浓度的LC/MS/MS方法建立35
• 2.3.5 标准溶液配制35-36
• 2.3.6 液质联用检测血浆样品的前处理方法36
• 2.3.7 VerifyNow抗血小板治疗监测系统检测阿司匹林、氯吡格雷抗血小板疗效36-37
• 2.3.8 病例分组与血浆样本池组建37
• 2.3.9 血浆样本总RNA提取纯化37-38
• 2.3.10 Illumina高通量测序38
• 2.3.11 冠心病患者血浆miRNAs表达水平检测38
• 2.4 统计分析方法38
• 2.5 结果38-47
• 2.5.1 病例临床基线资料及其对MP-H4血药浓度和血小板聚集率PRU的影响38-39
• 2.5.2 氯吡格雷及活性代谢产物血药浓度39-40
• 2.5.3 血小板聚集率PRU、ARU检测结果40-41
• 2.5.4 血小板聚集率与活性代谢产物MP-H4血药浓度的相关性41-42
• 2.5.6 病例分组结果42
• 2.5.7 血浆样本池illumina测序及miRNA筛选结果42-43
• 2.5.8 qRT-PCR验证血浆样本混合池的测序结果43-44
• 2.5.9 血浆miRN As表达与血小板聚集率PRU相关性44-45
• 2.5.10 血浆miRN A表达在氯吡格雷敏感与抵抗人群中的差异45-47
• 2.6 讨论47-50
• 2.7 结论50-51
• 第三章 血浆miRNAs对氯吡格雷药代动力学（PK）预测性研究51-61
• 3.1 引言51
• 3.2 研究对象51-52
• 3.2.1 冠心病患者入选51-52
• 3.2.2 冠心病患者临床基线资料录入52
• 3.3 材料与方法52-55
• 3.3.1 仪器与设备52-53
• 3.3.2 药品与试剂53-54
• 3.3.3 样品收集处理54
• 3.3.4 检测血浆中氯吡格雷及其代谢产物药代动力学的LC/MS/MS方法54
• 3.3.5 标准溶液配制54
• 3.3.6 血浆样品前处理54
• 3.3.7 冠心病患者血浆RNA提取纯化54-55
• 3.3.8 冠心病患者血浆miRNAs表达检测55
• 3.4 统计分析方法55
• 3.5 结果55-59
• 3.5.1 冠心病患者临床基线资料及其对氯吡格雷和代谢产物MP-H4药代动力学的影响55-58
• 3.5.2 血浆miRN As表达水平对氯吡格雷活性代谢产物MP-H4 PK参数（Cmax、AUC0-4h和Tmax）的相关分析58-59
• 3.6 讨论59-60
• 3.7 结论60-61
• 第四章 血浆miRNAs对氯吡格雷用药后心血管不良事件（MACE）和出血事件的前瞻性队列预测研究61-72
• 4.1 引言61
• 4.2 研究对象61-63
• 4.2.1 病例入选61-62
• 4.2.2 病例临床基线资料录入62
• 4.2.3 随访方案及资料采集62-63
• 4.2.4 事件定义63
• 4.3 材料与方法63-65
• 4.3.1 仪器与设备63-64
• 4.3.2 药品与试剂64
• 4.3.3 样品收集处理64-65
• 4.3.4 血浆RNA提取纯化65
• 4.3.5 血浆miRN As表达检测65
• 4.4 数据统计分析65
• 4.5 结果65-70
• 4.5.1 研究病例临床基线资料及其对主要终点MACE事件的影响65-66
• 4.5.2 血浆miRN As表达水平与MACE事件发生风险分析结果66-68
• 4.5.3 临床基线特征和血浆miRNAs表达水平对次要终点出血事件的影响68-70
• 4.6 讨论70-71
• 4.7 结论71-72
• 全文结论72-73
• 参考文献73-79
• 攻读硕士学位期间的成果79-80
• 致谢80-81
• 附录81-83
• 缩略词81-83

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张昌明;张婉芬;刘春蓓;曾科;刘志红;;循环microRNAs与局灶节段性肾小球硬化患者疾病活动的关系[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2013年04期

2 魏丽萍;许振坤;姚朱华;;MicroRNAs在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的作用及研究进展[J];医学综述;2011年16期

3 任景怡;许宁;韩冠平;陈红;;microRNAs参与动脉粥样硬化疾病的发生[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年06期

4 丁婧;孟雁;;microRNAs与糖尿病[J];中国糖尿病杂志;2010年07期

5 徐莎;刘厚奇;;MicroRNAs与信号转导及转录激活因子[J];第二军医大学学报;2013年04期

6 张婉芬;张昌明;刘春蓓;秦卫松;郑春霞;曾科;刘志红;;尿液microRNAs作为局灶节段性肾小球硬化疾病活动生物标志物的研究[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2013年04期

7 谭胜;朱涛;;MicroRNAs在消化系相关肿瘤中的研究[J];胃肠病学和肝病学杂志;2009年03期

8 何相宜;袁耀宗;;胰腺癌与糖尿病、胃肠道微生态和microRNAs关系的研究现状[J];胃肠病学;2014年04期

9 曹美群;陈德珩;张春虎;吴正治;;抑郁模型大鼠海马内特异性microRNAs的筛选以及柴胡疏肝散的干预作用[J];中国中药杂志;2013年10期

10 高金保;刘霞;;非酒精性脂肪性肝病患者血清中循环microRNAs表达水平及意义[J];中国肝脏病杂志(电子版);2014年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王芸;陶筱川;吕应堂;;水稻MicroRNAs在水稻发育过程中的功能研究[A];湖北省植物生理学会第十五次学术研讨会论文集[C];2007年

2 周宁;陈宝元;曹洁;汤华;刘民;邓园;王彦;;microRNAs在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清中的表达及意义[A];中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编[C];2013年

3 韦晖;王成;范钰;许琪;张辰宇;沈岩;;偏执型精神分裂症血浆microRNAs表达谱的筛查[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年

4 单志新;余细勇;林秋雄;符永恒;邓春玉;杨敏;林曙光;;microRNAs、炎症因子及其受体基因在自发性高血压大鼠中的表达[A];第九届全国心血管药理学术会议论文集[C];2007年

5 郭士伟;刘蔼民;;小RNA(MicroRNAs)的发现、结构和功能[A];2006年中国植物逆境生理生态与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年

6 郑宗基;刘晓萌;张雷;赵倩伟;李晨钟;薛耀明;;β3肾上腺素受体激动剂对C57BL/6J小鼠脂肪组织棕色化相关基因和microRNAs的影响[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年

7 李海怡;高璐;左洪亮;钟国华;;昆虫microRNAs功能研究进展[A];公共植保与绿色防控[C];2010年

8 刘红;韩璐璐;谢爽;娄莹;蒋娟娟;田蕾;许莉;李一石;;连续口服厄贝沙坦对健康中国志愿者血浆MicroRNAs表达的影响[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年

9 方巧云;杨森;张学军;;MicroRNAs及其在皮肤病上的应用[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年

10 韩璐璐;刘红;康健;边文彦;庞会敏;李一石;;冻存血浆中MicroRNAs稳定性评价[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 詹芸;MicroRNAs在乳腺癌侵袭转移过程中的功能与机制研究[D];北京协和医学院;2015年

2 谭明;血小板源外泌小体中microRNAs作为预测动脉粥样硬化血栓形成的机制研究[D];北京协和医学院;2016年

3 戴欣;microRNAs在胰腺癌相关性糖尿病中的表达及相关机制研究[D];上海交通大学;2013年

4 周可树;MicroRNAs在慢性淋巴增殖性疾病中的表达及其在慢性淋巴细胞白血病预后中的意义研究[D];中国协和医科大学;2010年

5 刘雯静;胰腺癌特异性microRNAs的筛选及机制研究[D];北京协和医学院;2011年

6 于双妮;胰腺癌差异表达microRNAs的鉴定及功能研究[D];北京协和医学院;2008年

7 熊薇;微泡microRNAs在肝癌诊断及发病机制中的作用研究[D];华中科技大学;2012年

8 陈娜;STAT3介导microRNAs调控的IL-9过表达在慢性淋巴细胞性白血病免疫调节机制中的研究[D];山东大学;2014年

9 高刚;氡致肺癌及肺损伤相关microRNAs的研究[D];中国疾病预防控制中心;2010年

10 张彩彩;硫化氢通过microRNAs调控血管新生的机制研究[D];复旦大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王倩;基于双链特异性核酸酶介导的MicroRNAs检测新方法的研究[D];华东理工大学;2016年

2 唐千捷;血浆microRNAs预测氯吡格雷抗血小板疗效及心血管不良事件的研究[D];广东药科大学;2016年

3 杨翠云;基于信号放大的高灵敏腺苷与MicroRNAs电化学生物传感器的制备及研究[D];西南大学;2016年

4 杜彦丽;microRNAs对黄牛和水牛朊病毒基因转录后调控研究[D];云南大学;2016年

5 杨丹凤;以microRNAs为靶标结核病新型检测方法的建立[D];吉林农业大学;2016年

6 王晓钰;基于microRNAs对上皮连接蛋白的调控探讨升麻素抗过敏性炎症复发的机制[D];南京中医药大学;2016年

7 张继磊;炎症相关因子和microRNAs在胃MALT淋巴瘤中发病机制的探讨[D];第二军医大学;2012年

8 罗婷;microRNAs与慢性阻塞性肺疾病的研究进展[D];重庆医科大学;2015年

9 罗晓燕;桃microRNAs鉴定及内参基因的筛选[D];南京农业大学;2013年

10 肖玲;胚胎干细胞RNAs与microRNAs相互作用网络研究[D];华中师范大学;2012年

，

本文编号：621340