转RyR2基因致SK2通道功能变化治疗老龄房颤犬的机制研究

发布时间：2017-08-05 14:37

  本文关键词：转RyR2基因致SK2通道功能变化治疗老龄房颤犬的机制研究

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【摘要】：目的：探讨转RyR2基因致SK2通道功能变化治疗老龄性房颤犬的机制。方法：实验动物随机分组,假手术组(A组)7只,仅植入起搏电极,不行心房快速起搏。模型组植入起搏电极,行心房快速刺激8周后,将造模成功的房颤组随机分为两个亚组(B组和C组),每组7只。假手术组(A组)：经胸心包腔注射500μl生理盐水后仍不行心房快速起搏。AAV1/EGFP+房颤组(B组)：快速心房起搏8周后经胸心包腔内注射500μl携带EGFP(绿色荧光蛋白)基因的腺相关病毒溶液后继续行心房快速起搏14天。AAV1/RyR2- EGFP+房颤组(C组)：快速心房起搏8W周后经胸心包腔内注射500μl携带RyR2基因的腺相关病毒溶液后继续行心房快速起搏14天。持续快速左心耳起搏建立慢性房颤犬模型,测定两组心房和肺静脉各部位ERP变化和HE染色和电镜观察心肌组织病理组织和超微结构改变。然后采用免疫组化法,RT-PCR和Western blot检测RyR2和SK2基因和蛋白变化。结果：1.手术成功并顺利完成实验。模型组10只犬经持续快速左心耳起搏8周,均出现典型的心房颤动心电图改变,ERP随着时间明显缩短。超微结构显示：肌溶解,肌小节的丧失常位于核周其内可见肌小节碎片。肌小节缺失处可见大小和形状发生典型改变的线粒体。线粒体变长。闰盘扭模糊和不连续。2.经胸心包腔注射AAV1/RyR2-EGFP基因转染后,左、右心房冰冻切片均显示大量绿色荧光蛋白表达,呈强阳性。免疫组化检测犬左心房RyR2和SK2表达显示：可见大量棕色颗粒表达。犬左心房RyR2和SK2mRNA蛋白表达显示可见RyR2和SK2与β-actin基因和蛋白比较表达增强。结论：1.建立RAP模型能模拟房颤发生早期的电生理改变,稳定可靠,重复性好。与临床房颤相似,具有结构和电生理功能的异常。2.腺病毒导RyR2使其在心肌细胞内过表达,活性增加,可致RyR2蛋白和SK2蛋白上调。
【关键词】：房颤 SK2通道 RyR2基因
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.75
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-14
• 研究内容方法14-22
• 1. 实验材料14-15
• 1.1 研究对象14
• 1.2 实验动物分组14
• 1.3 实验器械和仪器14-15
• 1.4 实验药品和试剂15
• 2. 实验方法15-22
• 2.1 持续快速心房起搏犬致房颤模型制作15-16
• 2.2 心房及肺静脉各部位有效不应期的测量16-17
• 2.3 标本采集和病理学形态学观察17
• 2.4 经胸心包腔注射AAV1/RyR2-EGFP基因转染17-18
• 2.5 AAV1/RyR2-EGFP表达检测18
• 2.6 免疫组化测定RyR2和SK2在右心房组织中的表达18
• 2.7 提取心肌组织中的总RNA18-19
• 2.8 半定量RT-PCR检测心肌组织中SK2和RyR2表达强度19-20
• 2.9 Western blot测定RyR2和SK2蛋白表达20-22
• 结果22-32
• 讨论32-38
• 小结38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-44
• 综述44-51
• 参考文献48-51
• 攻读硕士学位期间发表的学位论文51-52
• 导师评阅表52

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本文编号：625419