RP105抑制TLR4信号通路对大鼠心肌缺血再灌注凋亡损伤的保护作用及其机制研究

发布时间：2017-08-08 19:22

  本文关键词：RP105抑制TLR4信号通路对大鼠心肌缺血再灌注凋亡损伤的保护作用及其机制研究

  更多相关文章： RP105 缺血再灌注损伤 心肌细胞凋亡 TLR4

【摘要】：目的：探讨RP105心肌过表达对TLR4信号通路介导的心肌缺血再灌注凋亡损伤的保护作用，并探讨其分子机制。 方法：将40只SPF级雄性SD大鼠(220-250g)随机分为4组(n=10)：生理盐水+假手术组(Sham组)、生理盐水+缺血再灌注组(I/R组)、Ad-EGFP+缺血再灌注组(Ad-E组)、Ad-EGFP-RP105+缺血再灌注组(Ad-E-R组)。采用多点注射法，将重组腺病毒载体或生理盐水在体转染大鼠心肌，转染后3天构建心肌缺血再灌注损伤模型。缺血30min再灌注4h后空气栓塞法处死大鼠，采用免疫荧光及Real-time PCR法检测转染基因EGFP、RP105表达；Evans blue+TTC双染法检测大鼠心肌梗死面积；TUNEL法检测大鼠心肌凋亡指数；Western blot检测线粒体相关的凋亡级联反应Bax、cytochrome c、Bcl-2、 caspase-9、 cleaved caspase-3表达情况以及RP105、 TLR4、 P38MAPK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1、p-c-Jun/AP-1蛋白表达。 结果：(1)重组腺病毒载体Ad-EGFP、Ad-EGFP-RP105转染心肌组织3天后，转染基因EGFP与RP105在心肌成功过表达。(2)与Sham组相比，I/R组、Ad-E组、Ad-E-R组心梗面积、心肌凋亡指数均显著增加(p0.05)；线粒体依赖性凋亡级联反应中促凋亡分子Bax、Cyt-c、caspase-9、cleaved caspase-3表达均明显增加(p0.05)，而抗凋亡分子Bcl-2表达明显降低(p0.05)；TLR4信号通路中TLR4、P38MAPK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1、p-c-Jun/AP-1蛋白表达水平均显著增加(p0.05)。(3)与I/R组、Ad-E组相比，Ad-E-R组心梗面积、心肌凋亡指数显著降低(p0.05)；线粒体依赖性凋亡级联反应中促凋亡分子表达明显降低，而抗凋亡分子表达显著升高；TLR信号通路中TLR4、p-P38MAPK、p-c-Jun/AP-1蛋白表达均明显降低(p0.05)。(4) I/R组、Ad-E组两组间心梗面积、心肌凋亡指数、线粒体依赖性凋亡级联反应中促凋亡分子、抗凋亡分子表达水平以及TLR4信号通路中TLR4、P38MAPK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1、p-c-Jun/AP-1蛋白表达水平均无统计学差异(p0.05)。(5) I/R组、Ad-E组、Ad-E-R组三组间P38MAPK及c-Jun/AP-1蛋白表达无统计学差异(p0.05)。此外，，p-P38/P38MAPK、p-c-Jun/c-Jun相对表达率比值结果表明：与Sham组比较，I/R组、Ad-E组、Ad-E-R组比值明显升高(p0.05);与I/R组、Ad-E组相比，Ad-E-R组比值显著降低(p0.05)；I/R组、Ad-E组比值升高程度无显著性差异(p0.05)。 结论：(1) Ad-EGFP及Ad-EGFP-RP105重组腺病毒成功转染心肌组织，可显著提高转染基因EGFP、RP105mRNA与蛋白表达；(2) RP105心肌过表达可显著降低缺血再灌注心肌损伤，降低再灌注心肌细胞凋亡；(3)心肌缺血再灌注中TLR4信号通路激活，促进下游信号分子P38MAPK及转录因子c-Jun/AP-1磷酸化活化，从而参与缺血再灌注心肌细胞的凋亡损伤过程；(4) RP105心肌过表达可抑制线粒体依赖性的凋亡级联反应，降低缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡；(5) RP105可能通过抑制TLR4/P38MAPK/AP-1信号通路活化，从而抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤。
【关键词】：RP105 缺血再灌注损伤 心肌细胞凋亡 TLR4
【学位授予单位】：三峡大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.4
【目录】：

• 内容摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文缩略词表9-10
• 引言10-13
• 材料与方法13-21
• 结果21-28
• 第一部分：缺血再灌注损伤模型的构建21
• 第二部分：腺病毒转染心肌组织后转染基因 EGFP、RP105 表达21-23
• 第三部分：腺病毒转染心肌组织后 RP105 蛋白及 mRNA 表达水平23-24
• 第四部分：Evans blue+TTC 双染法测定大鼠心肌梗死面积24-25
• 第五部分：TUNEL 法测定大鼠心肌细胞凋亡指数25-27
• 第六部分：RP105 对线粒体依赖性凋亡级联反应相关分子表达影响27
• 第七部分：RP105 对心肌组织 TLR4、P38MAPK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1和 p-c-Jun/AP-1 蛋白表达影响27-28
• 讨论28-31
• 小结31-32
• 参考文献32-36
• 综述36-42
• 参考文献40-42
• 后记42-43
• 附录43

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张磊,马虹,黄守坚,孙家钧;补体耗竭对心肌缺血再灌注的保护作用及机制[J];中华心血管病杂志;2001年06期

2 邱志兵;;内皮素与心肌缺血再灌注损伤[J];国外医学(老年医学分册);2001年04期

3 王大伟,莫成荣;中药减轻心肌缺血再灌注损伤实验研究概述[J];中国中医急症;2002年03期

4 狄鸣,成蓓,郭莲军,曾玉杰,曲玲;硫氮怡酮对心肌缺血再灌注损伤内皮功能的保护作用[J];临床心血管病杂志;2002年12期

5 马余鸿;热休克蛋白70、腺苷与心肌缺血再灌注损伤[J];广西医学;2003年02期

6 李春杰,余柏林;心肌缺血再灌注损伤机制研究进展[J];人民军医;2004年01期

7 嵇富海,薛张刚,蒋豪;p38 MAPK信号通路及其在心肌缺血再灌注损伤中的作用[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;2004年03期

8 李斌,张乐之,周红,何华美;心肌缺血再灌注时核孔复合体通透性变化与细胞核钙含量关系探讨[J];四川生理科学杂志;2004年04期

9 范书英,程文立,申玉良;心肌缺血再灌注损伤及其与间隙连接的关系[J];中日友好医院学报;2005年02期

10 王曙光;徐小虎;顾黎;窦建明;;急性心肌缺血再灌注对大鼠脑组织损伤及发生机制的探讨[J];山东医药;2005年34期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 彭涛;徐明江;滕旭;管又飞;;AZ12417698对大鼠心肌缺血/再灌注损伤保护作用的研究[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年

2 王彩歌;王永霞;;心肌缺血再灌注损伤研究进展[A];第二届全国中西医结合心血管病中青年论坛暨第二届黄河心血管病防治论坛资料汇编[C];2011年

3 吴仪;谢中光;;心肌缺血再灌注,有关自由基的几个问题(简报)[A];第三次全国急诊医学学术会议论文摘要汇编[C];1990年

4 李长岭;蒋峻;樊友启;丁芳;Wieming Fan;Ling Wei;;肿瘤坏死因子a受体1敲除对心肌缺血再灌注损伤作用的研究[A];2006年浙江省内科学学术年会、2006年浙江省老年医学学术年会论文汇编[C];2006年

5 王彩歌;王永霞;;心肌缺血再灌注损伤研究进展[A];2011年中华中医药学会心病分会学术年会暨北京中医药学会心血管病专业委员会年会论文集[C];2011年

6 陈协辉;李鹏;黄小平;王东明;陈宋明;杨泽民;陈智凡;许文敏;陈丽萍;;气体信号分子硫化氢对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[A];中华医学会第十五次全国心血管病学大会论文汇编[C];2013年

7 李培军;;心肌缺血再灌注损伤——基础与临床[A];中华医学会第一届重症心脏全国学术大会暨第二届西湖重症医学论坛、2013年浙江省重症医学学术年会论文汇编[C];2013年

8 辛平;朱伟;李静;刘铭雅;李京波;Andrew N.Redington;魏盟;;缺血后处理联合远端缺血期处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护的研究[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

9 吴志明;董丽莉;樊冰;潘翠珍;舒先红;;斑点追踪显像技术评价心肌缺血再灌注对心肌扭转影响的实验研究[A];第十届全国超声心动图学术会议论文[C];2010年

10 袁肇凯;黄献平;曹金枝;胡志希;简亚平;;心肌缺血再灌注损伤大鼠冠状微循环改变的实验研究[A];中国微循环学会第五届中国微循环学术大会论文摘要汇编[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前8条

1 陶春祥;何占德;中药单体防治心肌缺血/再灌注损伤[N];中国医药报;2004年

2 陶春祥 何占德;中医方药防治MI／R损伤研究[N];中国医药报;2004年

3 广文;让心肌重现生机[N];医药经济报;2003年

4 武开宏;心肌也能再生[N];健康报;2005年

5 ;防治急性心肌缺血再灌注损伤实验研究通过鉴定[N];中国高新技术产业导报;2001年

6 江苏省中医药研究院 李伟　沈明勤 陆晓晖;中药防治心肌缺血再灌注损伤作用机制探讨[N];中国医药报;2011年

7 ;中药可用于心脏保存[N];中国医药报;2003年

8 冯友根;黄芩苷对缺血心肌的保护作用[N];中国医药报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 闫福曼;心肌微环境诱导间充质干细胞通道蛋白表达及丹参酮的干预作用研究[D];广州中医药大学;2009年

2 吴成;心肌缺血再灌注损伤及药物保护的实验研究[D];中国协和医科大学;1992年

3 沈波;趋化因子受体5在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究[D];武汉大学;2013年

4 徐世安;大鼠心肌缺血再灌注损伤中肿瘤坏死因子的实验研究[D];中国医科大学;2002年

5 林运灵;高迁移率族蛋白1在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及丙酮酸乙酯的疗效[D];福建医科大学;2010年

6 郭佳;脂联素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究—抑制内质网应激[D];山西医科大学;2013年

7 吴锦波;促红细胞生成素在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的保护性作用研究[D];南方医科大学;2009年

8 张贵灿;腺病毒载体介导人白介素10转基因对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响[D];福建医科大学;2006年

9 李绪勇;维生素D_3对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用与机制探讨[D];武汉大学;2012年

10 杜秋香;Intermedin心血管保护作用及其机制的研究[D];山西医科大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王璋;长期间歇性缺氧预适应对心肌缺血再灌注损伤保护机制的研究[D];第三军医大学;2003年

2 陈唐葶;急性心肌缺血大鼠心肌α-辅肌动蛋白含量变化及其与心功能的关系[D];南方医科大学;2011年

3 方石虎;心肌缺血血浆尾加压素Ⅱ变化机制及心肌细胞表达的研究[D];第一军医大学;2004年

4 梁胜;血管紧张素转化酶2在心肌缺血再灌注损伤中的表达及氯沙坦预处理的影响[D];安徽医科大学;2007年

5 温永金;机械创伤大鼠对心肌缺血/再灌注损伤的敏感性增加[D];山西医科大学;2012年

6 缪文丽;中西医防治心肌缺血再灌注损伤的研究现状[D];黑龙江中医药大学;2002年

7 杨伟;氨基脲敏感型胺氧化酶在心肌缺血再灌注中的作用[D];汕头大学;2009年

8 李双凤;硫化氢延迟预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[D];中南大学;2010年

9 杨冬;TNNI3K基因表达与心肌肥厚形态学变化的相关性研究[D];河北医科大学;2010年

10 吴大盈;缺血再灌注大鼠心肌微循环障碍中纤维介素表达的研究[D];华中科技大学;2010年

本文编号：641648