携IL-8单克隆抗体声学造影对兔心肌缺血再灌注的靶向性研究

发布时间：2017-08-09 00:29

  本文关键词：携IL-8单克隆抗体声学造影对兔心肌缺血再灌注的靶向性研究

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【摘要】：[目的]建立兔心肌缺血再灌注模型通过携白介素8(IL-8)单克隆抗体声学造影剂行心肌声学造影来进行靶向性的研究。[方法]1.兔心肌缺血再灌注模型制备及判定：65只日本大耳兔随机分为两组：心肌缺血再灌注组(I/R组)和假手术组(Sham组),I/R组为开胸利用自制阻断装置阻断左冠状动脉前降支血流,并于缺血90 min解除阻断,再灌注开始；假手术组为开胸后不阻断左冠状动脉前降支血流,其余与I/R组一致。术中持续心电监测,两组兔分别于术前、缺血90 min,再灌注60 min、120 min、180 min及1w经兔耳中动脉抽取3m1血样,测定肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(MB)浓度。于缺血90 min时处死兔后取出心脏,行HE染色及特殊MASSON染色观察心肌病理学改变,利用免疫组化染色实验对心肌缺血再灌注组织IL-8的监测及表达。2.靶向声学造影剂的制备及鉴定：采用共价偶联法通过SPDP交联剂将IL-8单克隆抗体偶联于SonoVue微泡表面,显微镜下观察微泡大小、形态及分散度并通过玻片凝集实验及荧光染色实验证明偶联是否成功。3.心肌声学造影检查：两组兔分别于术前,缺血90 min,再灌注60 min、120min、180 min及1w行常规心脏超声检查后,再分别用即时配制的SonoVue造影剂、携IL-8单克隆抗体的靶向造影剂、对照组SonoVue造影剂行心肌声学造影检查,取得动态图像后脱机应用QLAB软件进行分析。4.统计学方法：应用SPSS 17.0统计软件,兔各项生理指标服从正态分布,以均值±标准差(x±s)表示,同一样,本进行两次不同处理用配对t检验,两不同样本进行相同处理用两独立样本t检验,多组样本均数比较用单因素方差分析。P0.05为差异有统计学意义。[结果]1.兔心肌缺血再灌注模型建立：术前观察两组兔二维超声、心电图均无异常。心电图：I/R组兔缺血90 min ST段抬高,再灌注开始ST段回落；Sham组兔心率稍增快,ST段未见变化；I/R组兔二维超声观察室壁运动幅度较Sham组减低,Sham组未见明显变化；血清学检测显示I/R组兔血清心肌损伤标志物明显高于Sham组(P0.05),于再灌注180 min后达高峰,1w逐渐下降至正常范围；Sham组兔术前及术后血清心肌损伤标志物中未见明显变化；病理结果显示：I/R组兔左前降支所供血区域的可见心肌缺血,Sham组兔未见明显心肌缺血。免疫组化染色显示I/R组心肌细胞表面几乎着棕色；而Sham组心肌细胞表面未见明显着色,由此可证明缺血区域产生炎症反应,且损伤的心肌组织释放大量IL-8。2.靶向声学造影剂的鉴定：通过玻片凝集实验与免疫荧光实验可得出IL-8单克隆抗体已成功偶联到SonoVue微泡外壳表面。3.心肌声学造影检查：即时配制的SonoVue造影剂行心肌声学造影,造模节段前壁、前间隔的造影剂超声均值、超声峰值均明显低于非梗死节段下壁、后间隔,术前同样的节段及Sham组相应的节段(均有P0.05)；实验组(携IL-8单克隆抗体偶联SonoVue声学造影剂)行心肌声学造影,造模节段前壁、前间隔的造影剂超声均值、超声峰值均高于对照组(SonoVue声学造影剂)(均有P0.05)。以Flash后第一帧为起点：SonoVue造影剂行心肌声学造影,造模节段前壁、前间隔的造影剂达峰时间均晚于非梗死节段下壁、后间隔,术前同样的节段及Sham组相应的节段(均有P0.05)；实验组行心肌声学造影,造模节段前壁、前间隔的造影剂达峰时间均早于对照组同样的节段(均有P0.05)。以开始注射造影剂为起点：同一只实验兔,实验组行心肌声学造影,造模节段前壁、前间隔心肌开始显影的时间均早于对照组同样的节段(均有P0.05)。利用一次负指数方程[y(t)=A*(1-exp(-B*t))+C]参数可得出：SonoVue造影剂行心肌声学造影,I/R组两造模节段前壁、前间隔的心肌血容量(A值)、心肌血流速度(B值)及局部心肌血流灌注量(A*B值)均明显低于非梗死节段下壁及后间隔(均有P0.05),前壁、前间隔的A值、B值、A*B值均明显低于Sham组相应的节段(均有P0.05)；而用携IL-8单克隆抗体的靶向造影剂时,实验组造模节段前壁、前间隔A值、A*B值均高于对照组相应的节段(均有P0.05),而B值在两组间未见显著差异(均有P0.05)。[结论]1.实时心肌声学造影(SonoVue造影剂)证实I/R组缺血及再灌注各时段造模节段心肌血容量、心肌血流速度及心肌血流灌注量均明显低于非梗死节段、Sham组相应的节段；造模节段造影剂视频强度的超声均值、超声峰值、达峰时间均明显低于非梗死节段、Sham组相应的节段,造模节段造影剂达峰时间均明显低于非梗死节段、Sham组相应的节段,说明MCE操作简便、易行,可以较敏感地显示心肌各节段增强的过程,能提高心肌缺血再灌注诊断的敏感性,并通过心肌各节段的增强情况来评价心肌再灌注的情况。2.采用共价偶联法通过SPDP交联剂将IL-8单克隆抗体偶联于SonoVue微泡表面的方法是可行的。各各组实验兔在经过开胸手术的创伤下,3h内又接受5次左心声学造影检查,均未发现任何因造影剂引发的不良反应,这就说明了利用携IL-8单克隆抗体的靶向造影剂心肌声学造影检查是安全的、可行的。3.炎性因子IL-8在心肌缺血早期(缺血90 min)增高明显,利用携带IL-8单克隆抗体的靶向造影剂行心肌造影,IL-8单克隆抗体(中和心肌缺血部位的炎性因子,减轻炎症损伤。4.携IL-8单克隆抗体的靶向造影剂心肌声学造影发现：实验组造模节段造影剂视频强度的超声峰值、超声均值高于对照组,对照组心肌开始显影的时间、达峰时间均早于对照组,这说明靶向造影剂携带的IL-8单克隆抗体与缺血心肌释放的炎性因子IL-8之间的反应所致的靶向作用的存在。
【关键词】：心肌缺血再灌注 IL-8单克隆抗体 靶向造影剂 心肌声学造影
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.2
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 第一部分 兔心梗再灌注模型的建立及其评判的实验研究17-59
• 材料与方法17-24
• 结果24-53
• 讨论53-57
• 小结57-59
• 第二部分 携IL-8单克隆抗体的靶向性声学造影剂对兔心肌缺血再灌注的研究59-88
• 材料与方法59-65
• 结果65-83
• 讨论83-86
• 小结86-88
• 全文总结88-90
• 参考文献90-96
• 综述96-103
• 参考文献100-103
• 攻读学位期间获得的学术成果103-104
• 致谢104-105

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本文编号：642759