血管内皮生长因子对肌浆网钙泵活性的影响及其对心肌梗死的保护作用

发布时间：2017-09-02 22:31

  本文关键词：血管内皮生长因子对肌浆网钙泵活性的影响及其对心肌梗死的保护作用

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【摘要】：研究背景及目的VEGF-A是VEGF家族成员中最具有特征性的,其在组织和细胞中的含量最多,且功能最强。VEGF-A分为5种亚型,其中VEGF165是最为代表性、最为重要的同分异构体。VEGF165主要调控其受体VEGFR2的表达,从而改善心肌纤维的重构,AMI后VEGF通过结合VEGFR2来发挥其主要生物学作用。VEGF-A已被证实具有抗凋亡的作用,能维持新生血管及新生心肌细胞的稳定性。VEGF与VEGFR2结合后激活磷脂酶C(phospholipase C,PLC),进而导致三磷酸肌醇(inositol 1,4,5-triphosphate,IP3)的形成,IP3引发细胞内Ca2+浓度升高。心肌细胞SERCA可将Ca2+泵回肌质网内,调节细胞内游离Ca2+的浓度,调节心肌细胞的舒缩性。SERCA的活性受胞质内游离Ca2+浓度调节,Ca2+浓度增加,SERCA的活性随之增加。其与贮存蛋白结合并储存,是一种自身调节机制。因此,我们猜测VEGF与SERCA之间存在某种必然的联系,其作用桥梁很可能同Ca2+相关。为验证这一猜想,我们研究了VEGF对SERCA活性的影响及其作用机制。研究方法首先培养293细胞,将重组腺病毒转染该细胞后扩增纯化,用绿色荧光蛋白标记法测定腺病毒滴度。将6周龄ICR小鼠随机分为sham组,Ad-VEGF组,Ad-GFP组,SU5416组,然后对后三组采取结扎心脏冠状动脉前降支法制备小鼠心肌梗死模型并分别心肌注射Ad-VEGF,Ad-GFP,SU5416(VEGFR2阻断剂),sham组除为结扎前降支外,余处理与另外三组相同:1.通过心电图检测模型构建是否成功。2.分别于术后7天、14天检测小鼠超声心动图以了解各组小鼠的心功能是否有区别。3.麻醉取心脏后,取其右后肢胫骨裸骨后测其长度。4.ELISA法检测血清Tn-I水平。5.比色法测SERCA活性。6.利用蛋白免疫印记法(Western blot)检测VEGF,PLN,P-T17PLN,P-S16PLN,SERCA,HAX-1在各组心肌组织中的表达。7.HE染色检测心肌纤维化情况。8.马松三色染色(Masson)测心梗面积。9.Tunnel法测心脏组织凋亡。结果1.心梗术后小鼠各导联ST段(ST segment)弓背向上抬高。2.小鼠心梗后心功能降低,VEGF能够提高心梗后心功能,阻断VEGF受体后心功能降低。3.心梗术后,心肌受损,注射了Ad-VEGF的小鼠能在短期内使梗死边缘区心肌更好的再生,有助于提升心功能,降低心衰发生率,改善预后。4.Tn-I检测验证了心梗造模的成功,并且VEGF可以降低Tn-I水平,使其更早的降至正常,而阻断VEGF受体后,Tn-I水平升高。5.VEGF提高心梗后肌浆网钙泵活性,阻断VEGF受体后,活性降低。6.由蛋白免疫印迹实验结果可知,心梗后心肌梗死边缘区VEGF表达增加,转染VEGF的小鼠,VEGF表达量增加更明显,比其他心梗组多1倍,Ad-VEGF转染心肌细胞成功。VEGF降低PLN与SERCA2a蛋白表达量的比值,升高P-T17PLN与PLN的比值,升高P-S16PLN与PLN的比值。VEGF与HAX-1蛋白的表达量增加有相关性。7.心脏病理切片HE染色说明VEGF组心梗面积(myocardium infarct size MIS)小于其他心梗组。8.心脏病理切片Masson染色结果证实了VEGF降低心肌纤维化程度,抑制心肌重塑的作用。9.Tunnel(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling)法测心肌细胞凋亡,分析统计后发现VEGF组凋亡减少,与前人研究结果一致。结论VEGF可以增强心肌肌浆网钙泵活性,提高心梗后心功能,减少心肌重塑和凋亡,对心梗有保护作用。
【关键词】：血管内皮生长因子(VEGF) 心肌梗死 SERCA2a PLN 心肌重塑
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.22
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文缩略词表11-13
• 引言13-14
• 材料与方法14-38
• 结果38-58
• 讨论58-64
• 结论64-65
• 参考文献65-68
• 综述 血管内皮生长因子对急性心肌梗死保护作用的研究进展68-77
• 参考文献74-77
• 个人简历及在学期间发表的学术论文77-78
• 致谢78-79

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1 张华;血管内皮生长因子对肌浆网钙泵活性的影响及其对心肌梗死的保护作用[D];郑州大学;2016年

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本文编号：781288