低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响及其机制的初步研究

发布时间：2017-09-04 11:24

  本文关键词：低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响及其机制的初步研究

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【摘要】：[目的]观察低剪切应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的影响并探讨其机制。[方法](1)apo E-/-小鼠喂饲高脂饮食,分别于0、4、8和12周处死,取主动脉窦部做冰冻切片,主动脉提蛋白。HE和油红O染色法观察动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)斑块病变;免疫组织化学法和Western blot检测BECLIN 1、LC3和P62以及TET2的蛋白表达;免疫荧光法观察5-m C和5-hm C的含量。(2)将HUVECs置于体外灌流系统,分别以低剪切应力(5 dyne/cm2)和正常剪切应力(15 dyne/cm2)处理1h,Western blot检测BECLIN 1、LC3和P62以及TET2的蛋白表达。再以巴伐洛霉素孵育2h,观察LC3II/LC3I的比值。(3)低表达和高表达TET2质粒转染HUVECs,Western blot检测BECLIN 1、LC3和P62的蛋白表达。再以不同剪切应力处理1h,Western blot检测BECLIN 1、LC3、P62和ET-1及e NOS的蛋白表达。[结果]随着高脂饮食时间的延长,As病变程度逐渐加重。As病变进程中BECLIN 1、LC3和P62的蛋白含量显著增加;TET2的蛋白表达明显降低;5-m C的含量显著增加,且其增加幅度显著高于5-hm C。与正常剪切应力组相比,低剪切应力组BECLIN 1和LC3II/LC3I的蛋白表达降低;自噬障碍标志物P62的蛋白表达增加;TET2的蛋白表达降低。巴伐洛霉素孵育2h后,低剪切应力组LC3II/LC3I无明显变化,而正常剪切应力组LC3II/LC3I明显增大。不同剪切应力处理后,高表达TET2可以上调BECLIN 1、LC3II/LC3I及e NOS的蛋白表达,下调P62及ET-1的蛋白表达;而低表达TET2可以下调BECLIN1、LC3II/LC3I及e NOS的蛋白表达,上调P62及ET-1的蛋白表达。[结论]低剪切应力下调血管内皮细胞TET2的蛋白表达从而抑制血管内皮细胞自噬。
【关键词】：低剪切应力 血管内皮细胞 自噬 TET2 动脉粥样硬化
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要缩略词英文索引11-12
• 第1章 绪论12-20
• 1.1 选题背景及意义12-13
• 1.2 国内外研究现状13-16
• 1.3 研究目标、内容及拟解决的关键技术问题16-20
• 1.3.1 研究目标16
• 1.3.2 研究内容16
• 1.3.3 研究方法和可行性分析16-17
• 1.3.4 拟解决的关键问题和创新点17-20
• 1.3.4.1 拟解决的关键问题17
• 1.3.4.2 创新点17-20
• 第2章 实验材料与研究方法20-28
• 2.1 实验材料与仪器20-23
• 2.1.1 实验所用动物、细胞和试剂20-21
• 2.1.2 主要仪器设备21-23
• 2.2 实验方法23-28
• 2.2.1 动物饲养及心脏和主动脉的获取23
• 2.2.2 细胞培养和灌流系统23-24
• 2.2.3 质粒转染24
• 2.2.4 蛋白质免疫印迹24-26
• 2.2.4.1 蛋白质提取24-25
• 2.2.4.2 Western Blot25-26
• 2.2.5 HE染色26
• 2.2.6 油红O染色26-27
• 2.2.7 免疫组织化学染色27
• 2.2.8 免疫荧光染色27
• 2.2.9 统计学方法27-28
• 第3章 实验结果28-42
• 3.1 As病变进程中自噬相关基因的蛋白表达28-31
• 3.2 低剪切应力对血管内皮细胞自噬和自噬流的影响31-33
• 3.3 As病变进程中TET2的蛋白表达33
• 3.4 As病变进程中 5-mC和 5-hmC含量的改变33-34
• 3.5 低剪切应力对血管内皮细胞TET2蛋白表达的影响34-35
• 3.6 TET2干预对血管内皮细胞自噬的影响35-37
• 3.7 TET2干预对低剪切应力条件下血管内皮细胞自噬的影响37-39
• 3.8 TET2干预对低剪切应力条件下血管内皮细胞ET-1 蛋白表达的影响39-40
• 3.9 TET2干预对低剪切应力条件下血管内皮细胞eNOS蛋白表达的影响40-42
• 第4章 讨论42-46
• 第5章 结论与展望46-48
• 5.1 结论46
• 5.2 不足与展望46-48
• 参考文献48-52
• 文献综述52-74
• References67-74
• 作者攻读硕士学位期间的科研成果74-76
• 致谢76-78
• 基金资助78

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李小红;郭凤霞;杨沁;李荣庆;赵战芝;危当恒;;自噬干预对低剪切应力下血管内皮细胞eNOS和ET-1表达的影响[J];中国动脉硬化杂志;2014年09期

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本文编号：791249