不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞诱导为心肌样细胞的比较

发布时间：2017-09-04 21:31

  本文关键词：不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞诱导为心肌样细胞的比较

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【摘要】：目的:研究不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞的一般特性如形态、核型、增殖动力学、表型特点和分化成心肌样细胞潜能等生物学性状,并在低血清浓度下培养诱导后的心肌样细胞,并观察心肌样细胞增殖和特异性蛋白的表达情况。方法:采用全骨髓贴壁的培养方法获取大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)。在细胞传到第2代时,分为5个组,加入含有不同浓度胎牛血清(FBS)的L-DMEM培养基,FBS浓度分别为0%,2.5%,5%,7.5%,10%,并以浓度系数标记各组。取第4代BMSCs,利用MTT法在(1、3、5、7、9d)检测细胞的增殖。分别取各组传代到第4代BMCS,加入Ang II和5-Aza(Ang II 0.1μmol/l和5-Aza 10μmol/l)诱导剂诱导,24h后吸弃含有诱导剂的培养液,跟换新培养液继续培养。取诱导后各组的第1代(y P1)细胞,使用MTT法检测类心肌细胞在(1、3、5、7d)的生长活力,细胞免疫荧光化学染色法检测诱导后培养至第4周时各组中c Tn I,Cx-43两类心肌相关蛋白的表达情况,并计算其表达率。结果:1.在5种不同浓度FBS下的L-DMEM培养液均可获得第4代BMSCs;MTT检测细胞活力(1、3、5、7、9d)结果显示,5组不同体积分数的FBS培养液均可以促进BMSCs的生长,10%组2.5%,5%,7.5%组0%组,差异有统计学意义(p0.05),2.5%,5%,7.5%组组间比较,差异无统计学意义(p0.05)。2.各组BMSCs在AngⅡ和5-Aza(AngⅡ0.1μmol/L、5-Aza 10μmol/L)联合作用诱导时,能分化为类心肌样细胞。诱导后的细胞MTT检测细胞活力显示10%组7.5%5%,2.5%组0%组(p0.05),而5%,2.5%组比较未见明显差异(p0.05)。各组心肌样细胞的蛋白的表达显示10%组7.5%5%,2.5%组0%组差别有统计学意义(p0.05),而5%,2.5%组比较未见明显差异,差异无统计学意义(p0.05)。结论:胎牛血清的浓度对骨髓间充质干细胞的扩增有正向作用,胎牛血清的浓度为2.5%时可以满足BMSCs的分离和扩增,且细胞活力好,要想在短期内较快获得较纯的BMSCs,可以用提高FBS浓度的办法。BMSCs经诱导后的细胞,胎牛血清浓度对其活力有正向作用,这些细胞可以产生心肌细胞所表达的c Tn I、Cx-43两组蛋白。
【关键词】：胎牛血清 骨髓间充质干细胞 类心肌样细胞 5氮杂胞苷 血管紧张素II
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 常用缩写词中英文对照表9-10
• 前言10-11
• 1 材料和方法11-17
• 1.1 实验动物、试剂及仪器11-12
• 1.2 实验方法12-16
• 1.3 统计学分析16-17
• 2 结果17-21
• 2.1 不同浓度胎牛血清（FBS）下细胞生长情况和形态结构的观察17
• 2.2 不同浓度FBS培养下的BMCSS的生长曲线17-18
• 2.3 ANGⅡ和 5-AZA诱导后细胞的形态学特征18-19
• 2.4 ANGⅡ和 5-AZA诱导不同浓度FBS培养下的类心肌样细胞的生长曲线19-20
• 2.5 细胞免疫荧光染色诱导后CTNI、CX-43 蛋白表达情况和组间阳性率比较..1020-21
• 3 讨论21-25
• 3.1 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化21-22
• 3.2 不同浓度胎牛血清培养下的BMCS的生长曲线22-23
• 3.3 ANGⅡ和 5-AZA诱导骨髓间充质干细胞的分化、培养23-24
• 3.4 不同浓度FBS培养下的类心肌样细胞的生长情况24
• 3.5 细胞免疫荧光染色鉴定诱导后细胞CTNI、CX-43 蛋白的表达阳性率24-25
• 4 结论25-26
• 参考文献26-29
• 综述29-37
• 参考文献35-37
• 附录37-43
• 致谢43-44
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果44-45
• 个人简历45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 董亮;连锋;杨文钢;汪永义;薛松;;丁酸钠诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化[J];中国组织工程研究;2012年19期

2 苑媛;吕安林;陈丹;刁繁荣;李军杰;胡小菁;易甫;;血管紧张素Ⅱ诱导人骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞[J];心脏杂志;2006年03期

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本文编号：793956