广西巴马小型猪动脉病变与ABCA1关系的初步研究

发布时间：2017-09-05 00:49

  本文关键词：广西巴马小型猪动脉病变与ABCA1关系的初步研究

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【摘要】：大动脉因血流速度快、血压大等原因易出现内皮损伤。胆固醇代谢物质易粘附于损伤的血管内膜形成脂质沉积,血管发生堵塞及血栓形成,进而发展成为动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)。胆固醇代谢异常是动脉粥样病变的主要原因。胆固醇逆转运的限速蛋白ATP结合盒转运蛋白Al (ABCA1)对胆固醇代谢尤为重要。ABCA1与动脉病变之间的作用及调控关系复杂,现已发现多种microRNA参与对胆固醇逆转运及动脉粥样硬化的调控。本实验采用广西巴马小型猪为实验材料,选取常规饲养猪4头,饲以常规饲料作为对照组；选取高脂高糖饲喂猪,9头饲以高脂高糖饲料作为实验1组,5头饲以高脂高糖高胆固醇作为实验2组。实验为期3个月,其间每月检测血液生理生化指标,实验结束时检测动脉病理变化情况。克隆广西巴马小型猪ABC Al基因CDs并分析其生物学信息。检测ABCA1 mRNA及蛋白在各组实验猪主动脉、颈动脉、腹主动脉中的表达情况,同时检测以ABCA1为靶基因的niRNA-33a,miRNA-758在各组实验猪肝脏中的表达情况。构建ABCA1真核表达载体并验证其功能。通过以上实验来探讨动脉粥样硬化过程中ABCA1与胆固醇代谢的变化及影响ABCA1表达的microRNAs的变化情况,并为制作转ABCA1广西巴马小型猪奠定基础。实验结果显示：(1)实验2组血清总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平均呈上升趋势,实验1组与对照组血清总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平无明显差异。(2)主动脉、颈动脉、腹主动脉制作病理切片HE染色检验结果显示,实验1组和实验2组各动脉均出现不同程度病变。实验1组各动脉内膜增厚,中膜平滑肌细胞排列紊乱。实验2组各动脉病变较实验1组严重,内膜不平整,中膜增厚并出现巨噬细胞和泡沫细胞。(3)实验获得的广西巴马小型猪ABCA1 CDs全长2856bp,编码961个氨基酸,成熟蛋白无信号肽,ATP转运体活性中心位于第602-834位氨基酸。(4) qRT-PCR结果显示：在主动脉和颈动脉,实验2组ABCA1 mRNA表达量显著高于实验1组和对照组(P0.05)；在腹主动脉,实验2组和实验1组ABCA1 mRNA表达量均显著高于对照组(P0.05)。免疫组化半定量分析结果显示：在主动脉,ABCA1蛋白表达量实验2组实验1组对照组,但差异不显著；在颈动脉,实验1组和实验2组ABCAl蛋白的表达量显著高于对照组(P0.05)；在腹主动脉,实验2组ABCAl蛋白表达量显著高于实验1组(P0.05),实验1组显著高于对照组(P0.05)。免疫组化定位ABCAl蛋白在动脉内膜增厚区大量表达,且表达量随病变程度的加剧而升高。(5) qRT-PCR结果显示实验2组肝脏中ABCA1表达量显著高于对照组1和对照组(P0.05)cmiR-33a在实验1组、实验2组肝脏中的表达量均显著低于对照组(P0.05)。miR-758在实验1组肝脏中表达量显著高于对照组(P0.05),在实验2组中显著低于对照组(P0.05)。(6)转pEGFP-Nl-ABCAl的PK-15细胞可检测到绿色荧光,且ABCAl mRNA水平显著上升。在胞质注射的猪卵母细胞分裂期和囊胚期均能检测到绿色荧光。结论：高脂高糖和高脂高糖高胆固醇均可诱导广西巴马小型猪动脉病变,后者引发的病变更为严重,说明高水平胆固醇可加速动脉病变进程；病变区ABCAl表达量更高,说明ABCAl主要在病变区发挥功能；高脂高糖可引发miRNA-33a下调,高胆固醇则可进一步引发mRNA-758的下调,以提高ABCA1的表达,以将多余的大量胆固醇转运出细胞。实验构建的pEGFP-N1-ABCAl真核表达载体能够为后续构建转ABCAl基因的广西巴马小型猪奠定基础。
【关键词】：广西巴马小型猪 胆固醇 动脉病变 ATP结合盒转运蛋白A1 MircoRNA 真核表达载体
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 综述11-20
• 1.1 动脉粥样硬化疾病的现状11
• 1.2 动脉病变及其诱因11-13
• 1.3 胆固醇代谢与动脉病变关系13-14
• 1.4 ABCA1基因与胆固醇14-18
• 1.5 广西巴马小型猪18-19
• 1.6 本实验的目的及意义19-20
• 第二章 广西巴马小型猪高脂高糖高胆固醇饲喂实验20-29
• 2.1 实验材料与方法20
• 2.2 实验方法20-22
• 2.3 实验结果与分析22-27
• 2.4 讨论27-29
• 第三章 广西巴马小型猪ABCA1生物学信息分析与表达量检测29-52
• 3.1 实验材料29-31
• 3.2 实验方法31-41
• 3.2.1 广西巴马小型猪ABCA1生物学信息分析31-36
• 3.2.2 广西巴马小型猪ABCA1表达量检测36-41
• 3.3 实验结果与分析41-51
• 3.4 讨论51-52
• 第四章 广西巴马小型猪动脉病变过程中调控ABCA1的miRNA-33a及miRNA-758的表达量检测52-57
• 4.1 实验材料与方法52-54
• 4.2 实验结果与分析54-56
• 4.3 讨论56-57
• 第五章 广西巴马小型猪ABCA1真核载体构建57-69
• 5.1 实验材料与方法57-63
• 5.2 实验结果与分析63-67
• 5.3 讨论67-69
• 第六章 结论69-70
• 参考文献70-76
• 附录176-78
• 缩略词(Abbreviation)76-78
• 附录278-82
• 致谢82-83
• 发表论文83

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本文编号：794850