脂肪源性间充质干细胞CD73阳性亚群体外分化能力评价

发布时间：2017-09-06 03:39

  本文关键词：脂肪源性间充质干细胞CD73阳性亚群体外分化能力评价

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【摘要】：背景缺血性心脏病发病率和死亡率极高,严重威胁人类健康。心肌一旦梗死,心肌细胞数量迅速减少,疤痕组织替代正常组织结构,心室发生退行性重塑,心肌泵血功能下降,导致心力衰竭。近几年干细胞研究逐步深入,细胞移植被认为是一种极具临床应用前景的治疗缺血性心脏病的再生医学疗法。在所有可供心肌移植的种子细胞中,脂肪源性间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)具有分化为心肌细胞的潜能、易于获得、细胞存储量大以及伦理问题少,有望成为心肌修复最理想的干细胞之一。但是,ADMSCs是非均质的细胞群,不同亚群生物学特性的差异在一定程度影响ADMSCs的应用效果。因此,研究ADMSCs不同亚群的生物学特性、筛选向心肌分化的优势亚群,对加大研究针对性和提高临床疗效具有十分重要的意义。目的以CD73为分选标准,分离、纯化CD73阳性和CD73阴性的ADMSCs,研究两个亚群的生物学特性和向心肌分化、脂肪细胞分化、骨细胞分化潜能的差异,筛选出心肌分化优势亚群,为进一步开展细胞治疗心肌疾患提供实验参考。方法1.流式细胞仪分选CD73+/CD73-ADMSCs亚群,HE染色观测其形态,免疫荧光化学法检测亚群的间充质干细胞表面标记CD73、CD90和CD105的表达。2.5-aza诱导CD73+/CD73-ADMSCs亚群,细胞免疫荧光化学法检测心肌特异性蛋白心肌肌钙蛋白c-TnT, Real-time PCR检测c-TnT、Gata-4基因水平变化。3.成脂肪诱导剂诱导CD73+/CD73-ADMSCs亚群,油红O检测成脂肪细胞分化情况,分光光度计检测评价亚群的成脂肪细胞分化能力。4.成骨诱导剂诱导CD73+/CD73-ADMSCs亚群,茜素红检测成骨细胞分化情况,Real-time PCR检测骨细胞OST和RUNX2基因水平变化。结果1.流式细胞仪分选出CD73阳性和CD73阴性的ADMSCs, CD73-细胞以宽大扁平或方形细胞为主,表达CD105和CD90、不表达CD73；而CD73+ADMSCs主要是小细胞,形态特点呈细长形、三角形、星状或纺锤状,表达CD90、CD105和CD73。2.成心肌诱导后,CD73+ADMSCs心肌特异性c-TnT表达率45.6%、CD73亚群5.3%,基因水平上CD73+亚群也较阴性亚群高表达c-TnT、Gata-4(P0.01)。3.成脂肪细胞诱导后,CD73+ADMSCs与CD73-亚群油红O染色均显示阳性,差异无统计学意义（P0.05)。4.成骨细胞诱导后,CD73+ADMSCs与CD73-亚群茜素红染色均显示阳性,表达骨细胞特异性OST和RUNX2基因,差异无统计学意义（P0.05)。结论1.CD73+ADMSCs形态以小细胞为主,表达CD90、CD 105和CD73；而CD73-细胞主多为大细胞,表达CD105和CD90、不表达CD73。2.CD73+/+CD73-两个亚群均具有成骨、成脂和成心肌的分化能力,CD73+ADMSCs较CD73-ADMSCs在体外具有更高地向心肌分化的潜能,成骨和成脂分化定量上差异无统计学意义,提示CD73+ADMSCs具有更好的心肌治疗前景。
【关键词】：CD73 cTnT 心肌分化 脂肪间充质干细胞
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-22
• 结果22-31
• 讨论31-34
• 小结34-35
• 参考文献35-40
• 综述：心脏再生的研究进展40-63
• 参考文献56-63
• 附录63-64
• 攻读学位期间发表文章情况64-65
• 致谢65-66
• 个人简历66

【参考文献】

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1 胡诗宇;杨柳;孙海英;;关于骨髓间充质干/祖细胞群中RS细胞亚群的研究进展[J];生物医学工程学杂志;2009年04期

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本文编号：801984