Fgl2过表达下调PD-1的表达对自身免疫性心肌炎大鼠心功能的影响及分子机制研究

发布时间：2017-09-15 14:52

  本文关键词：Fgl2过表达下调PD-1的表达对自身免疫性心肌炎大鼠心功能的影响及分子机制研究

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【摘要】：目的:本实验目的在于建立大鼠自身免疫性心肌炎模型,通过对免疫负性调控信号分子PD-1在自身免疫性心肌炎大鼠心肌中的表达情况的检测,分析其在自身免疫性心肌炎病程发展中的意义,并以慢病毒介导Fgl2基因过表达进行干预,探讨Fgl2作为治疗自身免疫性心肌炎心肌免疫性损伤的干预靶点的可行性及其相关机制。方法:选择购买SPF级雄性6-7周龄Lewis大鼠32只,随机选取8只为正常对照组(NC组),余24只为实验组:以纯化的猪心肌肌球蛋白(PCM)皮下注射法建立大鼠实验性自身免疫性心肌炎模型。实验组随机分为3组,每组8只,即实验性自身免疫性心肌炎组(EAM组)、Fgl2慢病毒过表达自身免疫性心肌炎组(EAM-Fgl2组)、空载体组(EAM-GFP组)。EAM-Fgl2组与EAM-GFP组大鼠于造模第1天,分别经大鼠尾静脉注射包装好的Fgl2过表达慢病毒载体和等量的GFP慢病毒载体(5x107TU/只)。第40天,对各组大鼠行超声心动图检测,分别测定LVEDd、LVEDs、LVEF、LVFS等指标。完成超声检测后,摘除眼球取血提取血清,用于ELISA检测IL-17、IL-6、INF-γ炎性因子及BNP水平。处死大鼠后摘除心脏,一部分用于HE染色观察心肌炎性程度,另一部分用于提取蛋白,Western blot检测Fgl2、PD-1、Foxp3、RORγt蛋白表达,提取心肌组织mRNA,RT-PCR检测Fgl2、PD-1、Foxp3、RORγt的mRNA的表达情况。结果:(1)实验组大鼠出现明显的心功能不全的表现:免疫40天后,实验组大鼠出现弓背,呼吸频率增快,进食量、进水量、活动量均明显减少,体重减轻。(2)心功能改变情况:超声心动图检测示,实验组大鼠心脏明显扩大,HR、LVEF、LVFS较NC组降低,其中EAM-Fgl2组降低更明显(P0.05),提示Fgl2过表达加重心功能恶化程度。(3)心肌病理切片HE染色观察心肌损伤程度:正常组心肌细胞形态结构未见明显改变;实验组可见心肌细胞肥大,肌纤维排列紊乱,间质水肿;EAM-Fgl2组表现为心肌细胞变性、坏死,间质纤维化,可见嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润。Rezkalla法计算心肌炎性积分,EAM-Fgl2组较EAM组炎性积分增高(P0.05)。(4)血清ELISA检测相关炎症因子及BNP水平:与NC组比较,实验组大鼠血清中BNP、IL17、IL-6的表达水平增高(P0.05),其中EAM-Fgl2组与EAM组相比,BNP、IL-6及IL17明显升高(P0.05),EAM组与EAM-GFP组无差异。(5)RT-PCR及Western blot检测结果示:实验组Fgl2、RORγt、Foxp3的mRNA及蛋白表达量均较NC组增高(P0.05),PD-1的mRNA及蛋白的表达量较NC组降低,EAM-Fgl2组Fgl2过表达使Fgl2的mRNA及蛋白表达量明显增高,PD-1的mRNA蛋白表达量则较EAM组进一步降低(P0.05)。结论:(1)Lewis大鼠通过注射猪心肌肌球蛋白可成功诱导实验性自身免疫性心肌炎大鼠模型。(2)免疫性心肌炎大鼠心肌中PD-1的mRNA及蛋白表达降低。(3)慢病毒介导的Fgl2过表达可下调PD-1的表达,上调免疫性心肌炎大鼠血清中炎症因子的表达,加重心肌炎性程度,使心功能恶化更明显。(4)Fgl2及PD-1可能共同参与了实验性自身免疫性心肌炎大鼠心肌炎的免疫炎性反应过程。
【关键词】：免疫性心肌炎 凝血酶原酶(Fgl2) 程序性死亡因子1(PD-1) 心功能 白介素17(IL-17)
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.21
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩写词表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料与方法12-22
• 2.1 实验材料12-15
• 2.1.1 实验动物12
• 2.1.2 主要试剂12-13
• 2.1.3 主要仪器13-14
• 2.1.4 主要试剂配置14-15
• 2.2 实验方法15-21
• 2.2.1 建立动物模型和分组15
• 2.2.2 观察项目及检测方法15-21
• 2.3 统计学分析21-22
• 第3章 实验结果22-28
• 3.1 一般情况22
• 3.2 心脏彩超心功能改变22-23
• 3.3 心肌组织病理学改变23-25
• 3.4 酶联免疫法检测大鼠血清炎症因子水平25
• 3.5 荧光定量PCR检测m RNA表达25-27
• 3.6 WESTEN BLOT检测蛋白表达27-28
• 第4章 讨论28-33
• 4.1 Fgl2过表达自身免疫性心肌炎大鼠模型的建立28-29
• 4.2 Fgl2过表达使自身免疫性心肌炎大鼠心功能降低29
• 4.3 自身免疫性心肌炎大鼠心肌中PD-1 的表达下调29-30
• 4.4 Fgl2、PD-1 在自身免疫性心肌炎中免疫调节机制的探讨30-33
• 第5章 结论33-34
• 致谢34-35
• 参考文献35-38
• 综述38-43
• 参考文献42-43

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本文编号：857191