木犀草素-7-0-葡萄糖苷对心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2017-09-21 02:02

  本文关键词：木犀草素-7-0-葡萄糖苷对心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

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【摘要】：心血管疾病是严重威胁人类健康的重大疾病,具有高发病率、高致残率和高死亡率等特点,发病年龄有年轻化的趋势。心肌损伤类型包括局部缺血性损伤、缺血再灌注损伤、缺氧损伤、心肌肥大、缺氧／复氧损伤、氧化应激损伤、高磷血症引起的心肌损伤、癌症患者化疗药物引起的损伤等。其中,癌症治疗的化学疗法会导致短期或者长期的心脏血管的并发症。在癌症患者化学疗法诱导的心肌毒性的药物中,蒽环类抗生素是主要的毒性药物,由此限制了它的临床应用。而心肌细胞的营养缺乏在临床上也是普遍发生的,它介导多种心脏局部缺血病理过程,比如冠心病和心力衰竭等,在此过程中会发生自噬的激活,最终心肌细胞存活或者死亡。从天然植物中寻找新型、高效的具有心肌保护作用的药物仍是药学研究的重点之一。中药作用范围广,毒副作用少,能有效地清除氧自由基抗脂质过氧化作用和调节钙离子稳定,从而保护心肌细胞损伤。青兰属植物为多年生草本植物,广泛分布于我国西北地区。其地上全草所含总黄酮静脉滴注可以有效缓解犬急性心肌缺血,缩小急性心肌梗死面积,冠脉流量明显增加。为寻找对心肌细胞有保护作用的有效成分,开发利用该植物资源,我院天然药化教研室对该植物地上全草进行了系统的化学成分研究,通过对已提取的化合物进行的药理活性研究,发现木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin-7-O-Glucoside, LUTG)对心肌损伤有一定保护作用。前期研究表明LUTG预处理对多柔比星诱导的心脏毒性有显著的保护作用,且对多柔比星的抗肿瘤活性没有影响。但其具体的对心肌保护的作用机制尚不明确。本课题主要通过体外实验,研究LUTG对多柔比星或饥饿诱导的心肌细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制,为开发具有我国自主知识产权的心血管药物奠定基础。LUTG对多柔比星诱导的心肌细胞损伤的保护作用：细胞形态学检测结果显示,LUTG明显抑制多柔比星诱导的H9c2心肌细胞损伤；DAPI及吖啶橙染色结果显示,LUTG逆转多柔比星诱导的H9c2心肌细胞的凋亡；JC-1荧光探针检测结果显示,LUTG逆转多柔比星诱导的H9c2心肌细胞线粒体膜电势的去极化,逆转线粒体的损伤；Western blotting结果显示,多柔比星处理组p-PTEN的表达明显下降,p-Akt, p-ERK, p-mTOR,以及p-GSK-3β的表达明显增加；而预处理LUTG (20μM),明显上调p-PTEN的表达,明显下调p-Akt, p-ERK, p-mTOR,以及p-GSK-3β的表达。LUTG对饥饿诱导的心肌细胞损伤的保护作用：MTT检测结果显示,心肌细胞的活力随饥饿时间依赖性的降低,自噬抑制剂3-MA降低正常条件及饥饿条件下心肌细胞的活力。流式和Western blotting结果显示,饥饿会抑制心肌细胞的周期和细胞周期蛋白cyclinD1和p21的表达,并抑制p-Akt, p-mTOR的表达,而上调p-ERK的表达。LUTG预处理后,MTT结果显示,LUTG (5,10,20μM)明显保护饥饿诱导的心肌细胞的损伤,而自噬抑制剂3-MA可阻断LUTG对饥饿诱导的心肌细胞损伤的保护作用。Western blotting结果显示,LUTG可增强饥饿条件下心肌细胞的自噬,并下调p-ERK的表达。结论：LUTG对多柔比星或饥饿诱导的心肌细胞损伤都有明显的保护作用,可能通过调节Akt/mTOR及ERK信号通路而发挥心肌保护作用。
【关键词】：木犀草素-7-O-葡萄糖苷 心肌保护 Akt ERK mTOR
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 符号说明14-16
• 前言16-23
• 1. 心血管疾病的现状16-21
• 2. 心肌保护的研究进展21-23
• 第一部分 木犀草素-7-O-葡萄糖苷对多柔比星诱导的心肌细胞损伤的保护作用研究23-35
• 1. 实验材料23-24
• 1.1 化合物23
• 1.2 细胞株23
• 1.3 试剂23-24
• 1.4 仪器设备24
• 2. 实验方法24-27
• 2.1 细胞培养及冻存24-25
• 2.2 LUTG对多柔比星诱导的心肌细胞损伤的影响25
• 2.3 LUTG对心肌细胞凋亡的影响25-26
• 2.3.1 DAPI染色检测细胞凋亡25-26
• 2.3.2 AO染色检测细胞凋亡26
• 2.4 LUT对线粒体膜电位的影响26-27
• 2.5 Western blotting检测LUTG对相关蛋白表达的影响27
• 2.6 数据分析27
• 3. 试验结果27-32
• 3.1 LUTG对多柔比星诱导的H9c2心肌损伤的影响27-28
• 3.2 LUTG对多柔比星诱导的H9c2心肌细胞的凋亡的影响28-29
• 3.3 LUTG对多柔比星诱导的H9c2心肌细胞线粒体膜电势的去极化的影响29-30
• 3.4 LUTG对PTEN,Akt和ERK蛋白表达的影响30-32
• 4. 讨论32-35
• 第二部分 木犀草素-7-O-葡萄糖苷对饥饿诱导的心肌细胞损伤的保护作用研究35-46
• 1. 实验材料35-36
• 1.1 化合物35
• 1.2 细胞株35
• 1.3 试剂35-36
• 1.4 仪器设备36
• 2. 实验方法36-37
• 2.1 细胞培养及冻存36
• 2.2 细胞活力的影响36
• 2.3 细胞周期的影响36-37
• 2.4 LUTG对细胞内酸性磷酸酶活性的影响37
• 2.5 Western blotting检测相关蛋白表达的影响37
• 2.6 数据分析37
• 3. 试验结果37-44
• 3.1 饥饿对心肌细胞的活力的影响37-38
• 3.2 饥饿对心肌细胞的周期的影响38-39
• 3.2.1 饥饿对心肌细胞周期的影响38
• 3.2.2 饥饿对心肌细胞周期蛋白表达的影响38-39
• 3.3 饥饿对心肌细胞自噬相关蛋白表达的影响39-40
• 3.4 自噬抑制剂3-MA对正常及饥饿条件下心肌细胞活力的影响40
• 3.5 饥饿对Akt及ERK蛋白表达的影响40-41
• 3.6 LUTG对饥饿诱导的心肌细胞的损伤的影响41-42
• 3.7 LUTG对心肌细胞自噬的影响42-43
• 3.8 LUTG对溶酶体降解程度的影响43-44
• 3.9 LUTG对Akt,mTOR和ERK蛋白表达的影响44
• 4. 讨论44-46
• 总讨论46-48
• 结论48-49
• 参考文献49-57
• 致谢57-58
• 攻读硕士期间发表的论文58-59
• 附件59-69
• 学位论文评阅及答辩情况表69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李茜;连春微;方利群;刘斌;杨波;;氙气预处理对未成熟心肌缺血/再灌注损伤及氧化应激的影响[J];四川大学学报(医学版);2014年05期

2 Thekkuttuparambil Ananthanarayanan Ajith;Thankamani Gopinathan Jayakumar;;Mitochondria-targeted agents: Future perspectives of mitochondrial pharmaceutics in cardiovascular diseases[J];World Journal of Cardiology;2014年10期

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本文编号：891698