血管紧张素-（1-7）抑制氧化低密度脂蛋白所致的内质网应激及凋亡

发布时间：2017-09-21 04:27

  本文关键词：血管紧张素-（1-7）抑制氧化低密度脂蛋白所致的内质网应激及凋亡

  更多相关文章： 血管紧张素-(1-7) 氧化低密度脂蛋白 人脐静脉内皮细胞 内质网应激

【摘要】：目的:通过氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs),检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)指标及凋亡指标的表达,观察给予血管经张素-(1-7)[Angiotensin 1-7 Ang-(1-7)]及其MAS受体拮抗剂A-779后上述指标的变化,探究其对ox-LDL所诱导的HUVECs内质网应激的影响,为动脉粥样硬化的防治提供新的思路和方法。方法:用含12%胎牛血清(FBS)的1640完全培养基培养HUVECs,每1-2天换液,待细胞长到80%左右进行传代。在倒置显微镜下观察,HUVECs呈椭圆形或短梭形,取长势良好的第3代到第4代细胞用于实验。待细胞长至50%左右,换用不含FBS的4ml 1640饥饿12h,后弃去不含FBS的1640,换用含12%FBS的1640培养液4ml,将实验分为5组,对照组:不作处理;ox-LDL组:加入浓度为75mg/L的ox-LDL处理细胞24h;Ang-(1-7)+ox-LDL组:先加入浓度为1000nmol/L的Ang-(1-7)处理细胞30min,后加入浓度为75mg/L的ox-LDL处理细胞24h;A-779+Ang-(1-7)+ox-LDL组:先加入浓度为1000nmol/L的A-779处理细胞30min,再加入浓度为1000nmol/L的Ang-(1-7)处理细胞30min,最后加入浓度为75mg/L的ox-LDL处理细胞24h;A-779+ox-LDL组:先加入浓度为1000nmol/L的A-779处理细胞30min,再加入浓度为75mg/L的ox-LDL处理细胞24h。caspase-3、Tunel检测细胞凋亡,Bradford法检测HUVECs总蛋白含量,Western blot、RT-q PCR检测内质网应激指标的表达。结果:与对照组相比,ox-LDL组内质网应激指标在基因及蛋白水平表达增加,细胞调亡增多,说明ox-LDL可以导致HUVECs发生ERS,进而导致细胞凋亡;与ox-LDL组相比,Ang-(1-7)+ox-LDL组内质网应激指标在基因及蛋白水平表达减少,细胞凋亡减少,说明Ang-(1-7)可以部分抑制ox-LDL诱导的ERS,减轻HUVECs的凋亡;与Ang-(1-7)+ox-LDL组相比,A-779+Ang-(1-7)+ox-LDL组内质网应激指标在基因及蛋白水平表达增加,细胞凋亡增加,提示Ang-(1-7)通过MAS受体发挥其保护作用。结论:ox-LDL可以诱导HUVECs发生ERS,导致细胞凋亡;Ang-(1-7)可以部分抑制ox-LDL对HUVECs的损伤,并且这种保护作用可以被MAS受体拮抗剂所阻断。
【关键词】：血管紧张素-(1-7) 氧化低密度脂蛋白 人脐静脉内皮细胞 内质网应激
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 常用缩写词中英文对照表9-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-21
• 1.1 实验材料13-15
• 1.2 实验方法15-21
• 2 结果21-34
• 2.1 caspase-321-22
• 2.2 RT-qPCR22-27
• 2.3 western blot27-31
• 2.4 TUNEL31-34
• 3 讨论34-36
• 4 结论36-37
• 参考文献37-41
• 综述41-51
• 参考文献46-51
• 致谢51-52
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果52-53
• 个人简历53

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本文编号：892377