心肌缺氧复氧损伤中转录因子FoxO4对自噬的影响

发布时间：2017-09-21 23:31

  本文关键词：心肌缺氧复氧损伤中转录因子FoxO4对自噬的影响

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【摘要】：目的:观察心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤情况下转录因子Fox O4对细胞内过度自噬的影响,探讨其可能的机制,从而揭示转录因子Fox O4在心肌细胞H/R损伤情况下的作用。方法:1)以SD大鼠原代心肌细胞为研究对象,取出生1-3天的SD大鼠乳鼠心脏制备原代心肌细胞2)分别缺氧1h、3h、6h、8h、12h、14h、24h,复氧0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h,通过western blot检测LC3蛋白表达和乳酸脱氢酶(LDH)活性检测,选择出合适的缺氧和复氧时间点,建立缺氧复氧模型。3)确定好缺氧复氧条件在缺氧1h及复氧6h两个时间点上进行后,设立5个实验组:a)对照组:正常培养的原代心肌细胞;b)H/R组:原代心肌细胞培养5天后进行缺氧复氧处理;c)H/R+阴性干扰病毒组:原代心肌细胞培养2天后,转染阴性干扰病毒,转染3天后进行缺氧复氧处理;d)H/R+空载病毒组:原代心肌细胞培养2天后,转染空载病毒,转染3天后进行缺氧复氧处理;e)H/R+FoxO4-RNAi组:原代心肌细胞培养2天后,转染Fox O4-RNAi病毒,转染3天后进行缺氧复氧处理;f)H/R+Fox O4组:原代心肌细胞培养2天后,转染过表达FoxO4病毒,转染3天后进行缺氧复氧处理。4)通过Western blo检测各组Fox O4、LC3、p62蛋白表达情况,并检测各组LDH活性。实验数据采用均数±标准差(sx±)表示,通过统计软件IBM SPSS Statistics 20进行t检验,结果以p0.05认为有显著性差异。结果:1)心肌细胞经缺氧处理1h、3h、6h、8h、12h、14h、24h后,与正常对照组相比,LC3蛋白表达均有升高,在1h上升最明显(p0.05);上清中LDH活性均有升高,与正常组相比均有显著性差异(p0.05)。2)心肌细胞经缺氧1h复氧0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h,在复氧6h表达最明显(p0.05);上清中LDH活性均有升高,与正常组相比均有显著性差异(p0.05)。3)分别转染FoxO4-RNAi、FoxO4慢病毒表达载体72h后,对心肌细胞进行H/R处理。H/R组与正常对照组相比,H/R组的LDH活性有显著升高(p0.05),差异有统计学意义。与H/R组相比,H/R+Fox O4组LC3表达、LDH活性均有显著升高(p0.05),p62表达有显著降低(p0.05),差异均有统计学意义;H/R+Fox O4-RNAi组LC3表达、LDH活性均有显著降低(p0.05),p62表达有显著升高(p0.05),差异均有统计学意义。结论:1)LC3在正常SD大鼠原代心肌细胞中表达较低,缺氧复氧损伤下LC3在心肌细胞中的表达增加,在缺氧1h、复氧6h时表达增加最为明显,并以此作为本研究的模型。2)缺氧复氧损伤后,心肌细胞内自噬过度增强,细胞受损。上调FoxO4后,心肌细胞内过度自噬进一步增强,细胞受损情况加重;下调Fox O4后,心肌细胞内过度自噬被抑制,细胞受损情况也得到改善。说明Fox O4参与心肌细胞的自噬过程,并可以促进细胞自噬。
【关键词】：转录因子FoxO4 自噬 缺氧复氧 原代心肌细胞
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法13-27
• 2.1 材料13-18
• 2.1.1 实验动物及慢病毒13
• 2.1.2 仪器设备13-14
• 2.1.3 购置试剂14-15
• 2.1.4 自配试剂15-18
• 2.2 方法18-26
• 2.2.1 相关实验器材的灭菌处理18
• 2.2.2 原代心肌细胞的培养及H/R模型的建立18-20
• 2.2.3 原代心肌细胞的慢病毒转染20-22
• 2.2.4 实验分组22-23
• 2.2.5 LDH活性检测23
• 2.2.6 Western bolt检测23-26
• 2.3 数据处理和统计学分析26-27
• 第3章 结果27-33
• 3.1 SD大鼠原代心肌细胞培养状态27
• 3.2 H/R条件对原代心肌细胞活力及自噬的影响27-29
• 3.2.1 缺氧对心肌细胞活力及自噬的影响27-28
• 3.2.2 缺氧复氧对心肌细胞活力及自噬的影响28-29
• 3.3 FoxO4对心肌细胞H/R损伤后细胞活力及自噬的影响29-33
• 3.3.1 干扰、过表达FoxO4慢病毒转染心肌细胞的结果29-30
• 3.3.2 FoxO4对心肌细胞H/R损伤后细胞活力及自噬的影响30-33
• 第4章 讨论33-37
• 4.1 原代心肌细胞的培养及缺氧复氧损伤模型的建立34-35
• 4.2 心肌缺氧复氧损伤中转录因子FoxO4对自噬的影响35-37
• 第5章 结论37-38
• 5.1 结论37
• 5.2 不足之处与展望37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-41
• 综述41-47
• 参考文献46-47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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7 崔e，

本文编号：897523