花生四烯酸对巨噬细胞脂质积累和细胞周期影响的研究

发布时间：2017-09-24 17:15

  本文关键词：花生四烯酸对巨噬细胞脂质积累和细胞周期影响的研究

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【摘要】：花生四烯酸(arachidonic acid,AA)是体内分布最为广泛的多不饱和脂肪酸之一,主要以磷脂的形式存在于细胞膜上,对于维持细胞膜的结构和功能有着重要的作用。在生理或病理条件下,AA受到多种磷脂酶的作用,从细胞膜上游离出来,参与机体代谢。AA及其代谢产物构成了机体的主要炎症网络,参与机体的多种炎症反应,包括类风湿性疾病和动脉粥样硬化等慢性炎症性疾病。动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一类慢性炎症性心血管疾病,由脂质过载的巨噬细胞在受损动脉管壁内膜下积累所引发的不良免疫应答所引起。巨噬细胞作为体内一类重要的免疫细胞,参与了AS斑块形成、稳定及破裂的整个过程。巨噬细胞的脂质代谢紊乱所导致的泡沫细胞形成被视为是AS病情恶化的第一步。细胞内脂质积累与活性氧(ROS)水平关系密切,大量的脂质积累可导致胞内ROS含量升高。细胞内过量的ROS会对线粒体造成损伤从而影响其ATP的产生,而ATP可以通过与ATP结合盒转运体A1(ABCA1)结合,促进细胞内胆固醇外流,加速细胞内的脂质代谢。细胞内ROS升高会激活JNK信号通路诱导细胞周期停滞或凋亡。有研究显示JNK信号通路可通过调节Fox O蛋白来影响细胞周期。Fox O蛋白是一类很重要的蛋白家族,它的功能涉及细胞周期,DNA损伤修复,细胞凋亡和氧化应激等。AA及其代谢产物对AS的作用目前已研究较多,但是其对AS发展过程中巨噬细胞的作用及相关机制尚不清楚。本研究检测了AA对raw264.7巨噬细胞脂质积累及增殖凋亡等的影响,为进一步探讨AA对动脉粥样硬化中巨噬细胞的作用提供理论依据。结果显示:1)AA浓度梯度(0、40、60、80μM)处理血液单核细胞和raw264.7细胞系后,细胞活性受到明显的抑制,且具有浓度依赖性,而时间梯度处理结果显示48h组的细胞活性高于24h组。细胞内甘油三酯水平和脂滴的积累随着AA浓度的升高而显著增加,同时出现泡沫化趋势。细胞内ROS水平增高且ATP水平显著下降。2)AA浓度梯度处理raw264.7后,处于S期的细胞增多,且80μM处理组几乎没有检测到G2/M期的细胞。western blot结果显示,cyclin D和CDK4蛋白的表达受到抑制,p53和p27蛋白的表达升高,但caspase3蛋白的表达没有变化。3)AA浓度梯度处理raw264.7后,JNK蛋白和Fox O蛋白表达升高。JNK被抑制后AA对cyclin D、CDK4、p53和p27的下调或上调作用受到阻碍,同时也下调了Fox O蛋白表达。以上结果表明,AA能够阻碍raw264.7细胞的脂质代谢,抑制raw264.7的细胞周期但未诱导其凋亡,并且通过JNK信号通路影响raw264.7细胞周期蛋白的表达。
【关键词】：花生四烯酸 巨噬细胞 细胞周期 脂质积累 JNK
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩写词表10-12
• 引言12-14
• 第一篇 文献综述14-24
• 第1章 花生四烯酸及其生物学作用14-18
• 1 花生四烯酸14-15
• 2 花生四烯酸代谢网络及其生理作用15-18
• 2.1 COX途径16-17
• 2.2 LOX途径17
• 2.3 CYP450途径17-18
• 第2章 巨噬细胞与动脉粥样硬化18-24
• 1 巨噬细胞18-19
• 2 巨噬细胞的极化及生理作用19-20
• 2.1 M1型巨噬细胞19-20
• 2.2 M2型巨噬细胞20
• 3 动脉粥样硬化20-21
• 4 巨噬细胞在动脉粥样硬化中的作用21-24
• 第二篇 研究内容24-47
• 第1章 花生四烯酸对巨噬细胞活性及脂质积累的影响24-36
• 1 材料与方法24-29
• 1.1 材料24-26
• 1.2 方法26-29
• 2 结果29-33
• 2.1 AA对巨噬细胞细胞活性及增殖的影响29-30
• 2.2 AA对raw264.7 细胞内甘油三酯（TG）水平的影响30-31
• 2.3 AA对raw264.7 细胞脂质积累影响31-32
• 2.4 AA对raw264.7 细胞ROS和ATP水平的影响32-33
• 3 讨论33-34
• 4 小结34-36
• 第2章 花生四烯酸对巨噬细胞细胞周期的影响36-47
• 1 材料与方法36-40
• 1.1 材料36-37
• 1.2 方法37-40
• 2 结果40-44
• 2.1 AA对raw264.7 细胞凋亡蛋白caspase3的影响40
• 2.2 AA处理后raw264.7 细胞周期的变化40-41
• 2.3 AA对raw264.7 细胞周期相关蛋白表达的影响41-42
• 2.4 JNK在AA抑制raw264.7 细胞周期中的作用42-43
• 2.5 AA对raw264.7 细胞FoxO蛋白的影响43-44
• 3 讨论44-46
• 4 小结46-47
• 结论47-48
• 参考文献48-58
• 导师简介58-59
• 作者简介59-60
• 致谢60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：912476