应用微阵列芯片分析糖尿病大鼠下肢动脉硬化microRNAs差异表达谱

发布时间：2017-09-27 10:06

  本文关键词：应用微阵列芯片分析糖尿病大鼠下肢动脉硬化microRNAs差异表达谱

  更多相关文章： 糖尿病 下肢动脉硬化 microRNAs 微阵列

【摘要】：临床中我们发现,越来越多的糖尿病病人患上了下肢动脉硬化,临床表现特点有间歇性跛行、静息痛、缺血性坏疽。迄今动脉硬化具体详细的发病机制还未阐明,目前较为普遍认同“损伤应激学说”对其发病机制的表述,但是却未涉及基因调控。由于发病机制在基因调控领域中的空白,不能确定相关基因的干预靶点,影响到了对糖尿病下肢动脉硬化的有效预防和治疗。最近十年microRNAs成为基因研究领域中最热门的一环,预计约30%的人类基因都会受microRNAs调控,一个microRNA家族可能与多达200个靶基因结合,相比大量的靶基因,起调控作用的microRNAs数量要少的多,所以使得我们通过microRNAs研究糖尿病下肢动脉硬化的发病机制更容易进行,同时这也是运用microRNAs研究基因表达调控的巨大优势。所以本项研究首先通过建立大鼠模型,探究microRNAs在糖尿病下肢动脉硬化中的表达情况,为后续探究人类患有糖尿病与下肢动脉硬化的发病机制打下动物模型理论实验基础。目的：建立大鼠模型,检测糖尿病大鼠下肢动脉硬化(糖硬)与糖尿病大鼠下肢非动脉硬化(糖非)的下肢动脉组织中microRNAs的差异表达情况,探究异常表达的microRNAs参与糖尿病大鼠下肢动脉粥样硬化的可能的分子机制。方法：选取动物建模成功的患有糖尿病下肢动脉硬化和患有糖尿病非下肢动脉硬化的大鼠,取出下肢动脉血管组织,分别提取总的microRNAs,用microRNAs微阵列芯片中进行杂交检测,经过芯片扫描和数据分析,然后通过RT-qPCR验证芯片的扫描分析结果,最终获得糖尿病大鼠下肢动脉硬化的microRNAs差异表达谱。结果：筛选出10个与糖尿病大鼠患有下肢动脉硬化有关的microRNAs,即rno-miR-206-3p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-133b-3p、rno-miR-133a-3p、 rno-miR-325-5p、rno-miR-675-3p、rno-miR-411-5p、rno-miR-329-3p、rno-miR-335、 rno-miR-126a-3p,10个异常表达的microRNA都上调。RT-qPCR证实,其中9个microRNA与芯片检查结果一致,仅仅rno-miR-335的PCR检测结果与基因芯片检测结果相反,为表达下调。芯片显示糖尿病下肢动脉硬化上调明显的rno-miR-206-3p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-675-3p,分别达到了99倍,39倍,18倍,且P0.05,实时定量也显示相似的表达倍数。依据数据,值得关注这三种microRNAs,作为后续有关功能实验的关键microRNAs结论：有一群microRNAs在糖尿病大鼠下肢动脉硬化中扮演着重要作用,其表达过程很可能影响着血管动脉硬化的进程。
【关键词】：糖尿病 下肢动脉硬化 microRNAs 微阵列
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R543.5
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 缩略词表12-13
• 第一章 绪言13-28
• 1.1 糖尿病以及并发症13-15
• 1.2 糖尿病血管病变相关分子机制15-17
• 1.3 MicroRNAs的发现与发展17-18
• 1.4 MicroRNAs在生物中的发生和表达18-19
• 1.5 MicroRNAs的特点和研究领域19-23
• 1.6 MicroRNAs与糖尿病23-24
• 1.7 MicroRNAs与动脉硬化24-25
• 1.8 联想推测microRNAs可能参与糖尿病下肢动脉硬化的发生发展25
• 1.9 基因表达分析解决方案25-28
• 第二章 实验分析28-80
• 2.1 前言28
• 2.2 材料和方法28-41
• 2.2.1 材料28-31
• 2.2.2 方法31-41
• 2.3 统计学方法41
• 2.4 结果41-80
• 2.4.1 糖尿病大鼠下肢动脉硬化建模及诊断结果41-46
• 2.4.2 样本total RNA提取质检结果46-47
• 2.4.3 MicroRNAs数据质量评估47-53
• 2.4.4 片样品杂交信号相关性53-55
• 2.4.5 MicroRNAs芯片杂交信号原始扫描结果55-56
• 2.4.6 MicroRNAs芯片筛查结果56-63
• 2.4.7 差异表达microRNAs聚类分析63-64
• 2.4.8 筛选的差异表达microRNAs实时荧光定量PCR验证结果64-67
• 2.4.9 MicroRNAs芯片结果与实时定量PCR结果比较67-69
• 2.4.10 MicroRNAs与mRNA靶向关系分析69-80
• 第三章 讨论和结论80-86
• 3.1 讨论80-84
• 3.2 结论84-86
• 致谢86-87
• 参考文献87-92
• 附录A 攻读硕士期间发表论文目录92-93
• 附录B 其他需要说明内容93

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本文编号：929053