糖尿病下肢动脉硬化导致下肢缺血不同分期中C型利钠肽的表达变化研究

发布时间：2017-10-02 15:08

  本文关键词：糖尿病下肢动脉硬化导致下肢缺血不同分期中C型利钠肽的表达变化研究

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【摘要】：第一部分目的：探讨糖尿病下肢动脉硬化患者外周血CNP表达变化,并且比较该类患者在下肢缺血不同分期中血浆中CNP的含量,与下肢动脉硬化程度等行相关性分析。方法：选定成年糖尿病患者100例,其中糖尿病下肢动脉硬化患者50例,糖尿病未发生下肢动脉硬化患者50例,其中糖尿病下肢动脉硬化患者下肢缺血代偿期16例,糖尿病下肢动脉硬化患者下肢缺血失代偿期34例,除外高血压病。糖尿病下肢动脉硬化的诊断根据彩色多普勒检测,若发现下肢动脉内膜增厚或出现斑块判定为糖尿病下肢动脉硬化。采集实验对象空腹血5m1收集血浆。采用ELISA方法检测血浆C型利钠肽(C-type natriuretic peptide, CNP)含量比较糖尿病下肢动脉硬化患者和糖尿病未发生下肢动脉硬化患者C型利钠肽水平的差异,并且比较糖尿病下肢动脉硬化下肢缺血不同分期中患者血浆CNP含量水平的差异。统计学处理采用t检验。检测糖尿病下肢动脉硬化患者下肢缺血分期及评分、股动脉内-中膜厚度、内皮功能(肱动脉血流介导舒张)、下肢动脉狭窄/狭窄上端1-2cm处正常管径动脉的收缩期血流峰值速度(峰值血流比值)、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白、肌酐、糖尿病病程。将糖尿病下肢动脉硬化患者血浆C型利钠肽水平分别与下肢缺血分期及评分、股动脉内-中膜厚度、内皮功能(肱动脉血流介导舒张)下肢动脉狭窄/狭窄上端1-2cm处正常管径动脉的收缩期血流峰值速度(峰值血流比值)、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白、肌酐、糖尿病病程行相关性分析。实验数据使用SPSS17.0做统计分析。统计学方法为独立样本T检验。结果：1、糖尿病下肢动脉硬化患者血浆CNP含量均值为2.998±2.841pg/ml糖尿病未发生下肢动脉硬化患者血浆CNP含量均值为：5.667±1.215pg/ml,t=6.105,p=0.0000.05,差异有统计学意义。可认为糖尿病下肢动脉硬化患者血浆CNP含量较糖尿病未发生下肢动脉硬化患者血浆CNP含量降低。2、糖尿病下肢动脉硬化所致下肢缺血代偿期患者血浆中CNP含量均值为6.145±1.641pg/ml,糖尿病下肢动脉硬化所致下肢缺血失代偿期患者血浆中CNP含量均值为：1.518±1.235pg/m1,t=8.290,p=0.0000.05,差异有统计学意义。可认为糖尿病下肢动脉硬化患者下肢缺血失代偿期时其血浆中CNP含量较缺血代偿期患者血浆CNP含量降低。3、糖尿病下肢动脉硬化患者血浆CNP含量与糖尿病病程、空腹血糖含量、糖化血红蛋白HbA1C、血肌酐含量呈负性相关,其负性相关性并不明显。血浆CNP含量与下肢缺血评分、血浆低密度脂蛋白胆固醇LDL-C含量、股动脉内中膜厚度、下肢动脉狭窄/狭窄收上端1-2cm处正常管径动脉的缩期血流峰值速度(峰值血流比值)呈负性相关,其相关性明显。血浆CNP含量与血管内皮功能呈正相关性,其相关性明显。结论：1、糖尿病下肢动脉硬化患者血浆CNP含量较糖尿病未发生下肢动脉硬化患者血浆CNP含量明显降低,且糖尿病下肢动脉硬化患者下肢缺血失代偿期时其血浆中CNP含量较缺血代偿期患者血浆CNP含量降低。原因在于：糖尿病下肢动脉硬化患者其血管内皮细胞因长期血糖升高,糖、脂类物质代谢异常,产生大量低密度脂蛋白等脂类物质无法经巨噬细胞完全吞噬,而沉积于血管内膜壁上,导致血管内膜损伤,增厚,大量吞噬细胞吞噬脂类物质成为泡沫细胞而沉积于血管中膜,使血管平滑肌增生,而被损伤的血管内膜无法产生足够的CNP抑制血管平滑肌增生及迁移,导致血管内中膜厚度均增加,血管管腔内径变细,血管弹性下降,越是细小动脉,血管管腔受损越严重,CNP扩张血管功能降低,因此导致主要以小动脉及微动脉供血的远端肢体缺血严重,甚至坏死。第二部分目的：CNP转基因糖尿病小鼠的建立方法：使用C57BL/6小鼠构建CNP转基因小鼠。根据小鼠CNP基因c DAN全长编码区序列,利用软件Primer Premier 5.0辅助设计,构建pCAGGS/mCNP,然后分别用PCR、双酶切和测序三重方法对pCAGGS/mCNP进行鉴定。将重组载体pCAGGS/mCNP转染到人脐静脉血管内皮细胞株(HUVECs),用RT-PCR、免疫组化和Western blotting检测重组载体在体外的表达。通过受精卵原核显微注射线性化目的基因,随后进行输卵管内受精卵移植,用PCR方法根据mCNP的表达量鉴定首建鼠。将筛选出的F1代小鼠进行自交传代：F2代、F3代,进行下一步基因表型分析确定为纯合子基因小鼠后利用高糖高脂饮食喂养12周后构建CNP转基因糖尿病小鼠,监测血糖确定为糖尿病小鼠。结果：成功构建CNP转基因糖尿病小鼠
【关键词】：CNP 糖尿病 下肢动脉硬化 转基因小鼠 糖尿病小鼠 纯合子
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R543.5
【目录】：

• 中英文缩略语对照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-11
• 第一部分 糖尿病下肢动脉硬化导致下肢缺血不同分期中C型利钠肽的表达变化研究11-33
• 引言11-14
• 研究方法14-18
• 结果18-20
• 结论20-21
• 讨论21-32
• 展望32-33
• 第二部分 构建CNP基因过表达基因小鼠33-48
• 引言33-34
• 材料与方法34-37
• 实验结果37-45
• 讨论45-47
• 总结论47
• 展望47-48
• 参考文献及相关图片48-53
• 附录53-54
• 文献综述54-59
• 参考文献57-59
• 攻读硕士学位期间发表的文章59
• 研究生期间参与的课题59-60
• 致谢60

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本文编号：960263