载脂蛋白A1模拟肽对巨噬细胞泡沫化的抑制作用及机制

发布时间：2017-10-07 23:06

  本文关键词：载脂蛋白A1模拟肽对巨噬细胞泡沫化的抑制作用及机制

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【摘要】：目的:心血管疾病对人类健康造成很大危害,重要的病理机制是动脉粥样硬化,在动脉粥样硬化的形成中,巨噬细胞扮演重要角色,而氧化低密度脂蛋白则是泡沫细胞形成的一个主要因素。CD36、SR-A1等清道夫受体与泡沫细胞的形成关系密切,巨噬细胞在CD36、SR-A1的介导下能够对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)无上限的摄取,大量脂质积蓄在细胞内,从而形成泡沫细胞,进而诱发动脉粥样硬化。氧化脂质的细胞毒效应很强,导致泡沫细胞凋亡、坏死,粥样斑块构成的脂质核心形成。载脂蛋白A1是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白成分,其模拟肽L-4F和D-4F可以促使巨噬细胞中胆固醇外流,抑制血脂紊乱引起的小鼠AS,而D-4F是否能够通过调控清道夫受体表达从而抑制巨噬细胞内脂质蓄积呢?目前尚未见报道。本工作在ox-LDL诱导的巨噬源性泡沫细胞模型和(内质网应激)ERS诱导剂TM诱导的ERS模型上,研究SR-A1的表达情况,观察ERS抑制剂PBA是否能够拮抗ox-LDL及TM对SR-A1的诱导作用,研究ERS与泡沫细胞形成的关系和作用机制,进一步解释Apo A-I模拟肽D-4F与巨噬细胞SR-A1的相互作用关系。方法:选择RAW264.7巨噬细胞进行体外培养,给予ERS抑制剂PBA(20mmol/L)处理30 min,继续用ox-LDL(50 mg/L)干预12 h或2μmol/L毒胡萝卜素(thapsigagin,TG)或2 mg/L TM培养4 h。培养另外一组RAW264.7巨噬细胞,给予TM(0.5、1和2 mg/L)处理4 h或2 mg/L TM处理1、2和4 h。RAW264.7巨噬细胞用浓度为12.5、25和50 mg/L的D4F、50 mmol/L的紊乱模拟肽sD4F处理1 h或5 mmol/L PBA 30 min后,再用100 mg/L ox-LDL培养12 h。另外培养巨噬细胞,给予50 mg/L sD4F或D4F处理1 h后给予2 mg/L TM处理4 h。细胞活力检测采用MTT法,细胞内总胆固醇含量检测采用总胆固醇检测试剂盒;SR-A1和GRP78蛋白表达检测变化采用免疫印迹法;SR-A1和GRP78mRNA表达检测采用实时荧光定量pcr技术;dil-ox-ldl摄取情况检测采用多功能酶标仪。结果:ox-ldl组和正常对照组比较,巨噬细胞内tc含量增加显著(p0.01),用pba干预后,ox-ldl诱导的巨噬细胞内胆固醇蓄积量降低,与ox-ldl组比较其含量降低32.0%(p0.05)。ox-ldl处理组和正常对照组比较,ox-ldl组细胞sr-a1、grp78蛋白水平上调显明(p0.01),而pba对ox-ldl诱导的sr-a1上调抑制显著,与ox-ldl组比较降低48.4%(p0.05),细胞内grp78蛋白表达虽然降低39.3%,但没有统计学意义(p=0.057)。ox-ldl干预后sr-a1mrna水平显明上调,是对照组1.81倍(p0.05);在ox-ldl诱导sr-a1转录水平方面pba干预无明显影响,与ox-ldl处理组比较,两组细胞内sr-a1的mrna表达程度无统计学差异(p0.05)。巨噬细胞用tm干预后sr-a1蛋白水平显明上调,呈时间和浓度依赖性,最高峰为tm处理2h时(p0.05);tm的不同浓度(0.5、1和2mg/l)虽然能够使sr-a1mrna水平呈上升的趋势,但统计学无差异(p0.05)。tm能够增加巨噬细胞摄取ox-ldl,tm(2mg/l)尤为显著(p0.01)。pba+tm处理组与tm处理组比较,ox-ldl摄取量及sr-a1、grp78蛋白水平均降低明显,分别是tm组的51.3%、53.9%、60.0%(p0.05)。在tg作用下巨噬细胞sr-a1、grp78蛋白水平显著上调,而pba+tg组sr-a1、grp78蛋白水平均降低明显,分别是tg处理组的47.5%、58.3%(p0.05)。巨噬细胞用ox-ldl损伤后,再给予d-4f,巨噬细胞损伤减弱,细胞内胆固醇积蓄量减少。ox-ldl使巨噬细胞sr-a1、grp78表达水平升高,模拟肽d-4f明显抑制上述变化,并呈浓度依赖性。tm处理细胞后,细胞内sr-a1、grp78表达量升高,但是用d-4f干预后能下降其表达量,同时能够减少巨噬细胞摄取ox-ldl。结论:ers在ox-ldl诱导sr-a1上调中发挥重要作用,巨噬细胞吸收ox-ldl生成泡沫细胞。清道夫受体a1在内质网应激过程中受ox-ldl刺激表达上调,而apo-ai模拟肽d-4f能够对氧化低密度脂蛋白诱导的sr-a1上调有明显拮抗作用。模拟肽d-4f能够减少sr-a1表达,进一步减弱ox-ldl诱发的巨噬细胞损伤以及细胞内胆固醇积蓄,其机制可能和抑制ERS中GRP78介导的信号途径相关。
【关键词】：氧化低密度脂蛋白 高密度脂蛋白 内质网应激 巨噬源性泡沫细胞 清道夫受体A1
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 英文缩写11-13
• 前言13
• 材料与方法13-25
• 结果25-28
• 附图28-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-42
• 综述42-52
• 参考文献48-52
• 致谢52-53
• 个人简历53-54

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本文编号：990570