A20蛋白质O-GlcNAc修饰对大鼠主动脉平滑肌细胞炎症、反应应答的影响及机制

发布时间：2017-10-08 14:07

  本文关键词：A20蛋白质O-GlcNAc修饰对大鼠主动脉平滑肌细胞炎症、反应应答的影响及机制

  更多相关文章： A20 O-GlcNAc修饰 大鼠主动脉平滑肌细胞 炎症反应 迁移 增殖

【摘要】：[目的]本研究旨在探讨A20的O-GlcNAc(氧连-N-乙酰葡萄糖胺)修饰对NF-KB信号通路的调节效应,阐明细胞内蛋白质O-GlcNAc修饰对A20活性的影响及其在抗炎效应中的作用,从而明确蛋白质O-GlcNAc修饰提供血管保护效应的关键靶点。[方法](1)分别给予大鼠主动脉平滑肌细胞(rat aortic smooth muscle cells, RASMCs)转染空载体腺病毒(AD-NULL)、携带A20消减基因的腺病毒(AD-shA20-2)以及携带A20过表达基因的腺病毒(AD-A20-IRES)后,再给予Thiamet-G (150nmol/ml)页处理1小时,接着给予TNF-a (lOng/ml)处理6小时,提取RNA样本,采用real-time RT-PCR检测炎症因子MCP-1、P-selectin的mRNA表达。(2)分别给予RASMCs转染AD-NULL、AD-shA20-2及AD-A20-IRES后,给予Thiamet-G预处理(150nmol/ml) 1小时,随后将细胞接种在Boyden小室上腔,下腔注入含有TNF-α (10ng/ml)的DMEM,继续孵育24小时,细胞经固定、染色、漂洗,随机选择10个视野计数迁移至小室底面的细胞数量。(3)分别给予RASMCs转染AD-NULL、AD-shA20-2及AD-A20-IRES,接种至96孔板,饥饿细胞,给予Thiamet-G (150nmol/ml)预处理1小时,再给予10%FBS孵育24小时,采用CCK8试剂盒检测细胞的增殖情况。[结果](1)在转染AD-NULL的RASMCs, Thiamet-G预处理快速提高细胞O-GlcNAc修饰水平能够显著抑制TNF-a诱导的炎症因子MCP-1、P-selectin表达；在转染AD-shA20-2的RASMCs, A20蛋白表达明显减少,而Thiamet-G预处理不再能够抑制TNF-α诱导的炎症因子表达；转染AD-A20-IRES可显著增加A20蛋白表达,Thiamet-G预处理仍然能够抑制TNF-α诱导的炎症因子表达。(2)在转染AD-NULL的RASMCs, Thiamet-G预处理快速提高细胞O-GlcNAc修饰水平能够显著抑制TNF-α诱导的RASMCs迁移；在转染AD-shA20-2的RASMCs, Thiamet-G预处理不再能够抑制TNF-a诱导的RASMCs迁移；而在转染AD-A20-IRES的RASMCs, Thiamet-G预处理仍然能够抑制TNF-α诱导的RASMCs迁移。(3)在转染AD-NULL的RASMCs, Thiamet-G预处理快速提高细胞O-GlcNAc修饰水平能够显著抑制血清诱导的RASMCs增殖；在转染AD-shA20-2的RASMCs,消减A20蛋白表达可废除Thiamet-G对血清诱导RASMCs增殖的抑制；相反,过表达A20蛋白并不影响Thiamet-G对血清诱导RASMCs增殖的抑制。[结论]快速提高细胞内I-GlcNAc修饰水平能够显著抑制TNF-a诱导的RASMCs炎症介质表达和迁移以及血清诱导的RASMCs增殖,腺病毒介导的A20消减可以废除快速O-GlcNAc修饰对TNF-α诱导的RASMCs炎症介质表达和迁移的抑制以及对血清诱导RASMCs增殖的抑制。因此,A20很有可能是介导快速O-GlcNAc修饰对血管保护效应的关键分子靶标。
【关键词】：A20 O-GlcNAc修饰 大鼠主动脉平滑肌细胞 炎症反应 迁移 增殖
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.4
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 中英文对照缩略词表8-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-21
• 结果21-30
• 讨论30-34
• 结论34-35
• 参考文献35-39
• 综述39-47
• 参考文献44-47
• 致谢47-48
• 攻读硕士学位期间发表论文目录48-49

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张肖冰;师以康;;蛋白质O-GlcNAc糖基化与肿瘤[J];肿瘤;2013年11期

2 樊琼;顾玉超;于文功;;O-GlcNAc修饰与肿瘤发生及转移[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年08期

3 Mitsutaka Ogawa;Koichi Furukawa;Tetsuya Okajima;;Extracellular O-linked β-N-acetylglucosamine: Its biology and relationship to human disease[J];World Journal of Biological Chemistry;2014年02期

4 张积仁,张学庸;肿瘤患者血清碳水化合物末端Galβ1→4 GlcNAc糖链序列的表达[J];第四军医大学学报;1991年01期

5 第五永长;田金洲;;Tau蛋白磷酸化及O-GlcNAc糖基化修饰与阿尔茨海默病[J];中风与神经疾病杂志;2010年03期

6 蒯学章;张令强;贺福初;;O-GlcNAc修饰研究进展[J];军事医学科学院院刊;2006年01期

7 屈茹楠;琚娜娜;吴明军;赵德璋;王应雄;杨竹;于超;;功能蛋白O-GlcNAc糖基化修饰调控绒毛膜癌细胞的转移[J];中国细胞生物学学报;2013年07期

8 陈玉静;黄小波;陈文强;王宁群;;远志皂苷元对PC12细胞tau蛋白磷酸化和O-GlcNAc糖基化的影响[J];天津中医药;2013年01期

9 ;Chemoenzymatic synthesis of α2 3-sialylated carbohydrate epitopes[J];Science China(Chemistry);2011年01期

10 朱敏;沈爱国;丁炯;顾晓松;王鹤鸣;;Galβ-1,4-GlcNAc在钳夹伤后大鼠坐骨神经中的表达变化[J];中国临床解剖学杂志;2006年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 ;A novel coupled-enzyme method for O-linked GIcNAc transferase activity assay[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年

2 王文君;尹志东;谢端;曹宸铭;刘太宝;李铁海;郭丽娜;沈杰;赵炜;王欣;王鹏;;基于生物素修饰探针分子的O-GlcNAc转移酶研究[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年

3 ;Investigation of Efficient Constructing Gal(1-3)[NeuAc(2-6)]GlcNAc(2-6)Man[A];2011年全国药物化学学术会议——药物的源头创新论文摘要集[C];2011年

4 邢立静;李娟;徐云远;种康;;春化作用的O-GlcNAc信号调控机制[A];中国遗传学会植物遗传和基因组学专业委员会2009年学术研讨会论文摘要汇编[C];2009年

5 刘华东;李艳梅;;UDP-GIcNAc转移酶(OGT)的结构及作用机理[A];第七届全国酶学学术讨论会论文摘要集[C];2004年

6 Ju饩rez,S.;Hartweck,L.;Alamillo,J.M.;Simón-Mateo,C.;Pérez,J.J.;Fern饩ndez-Fern饩ndez,M.R.;Olszewski,N.E.;García,J.A.;;THE O-GlcNAc TRANSFERASE SECRET AGENT PLAYS A ROLE IN PLANT VIRUS INFECTION[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文摘要集[C];2005年

7 Peng George Wang;;Design and synthesis of O-GIcNAcase inhibitor[A];2011年全国药物化学学术会议——药物的源头创新论文摘要集[C];2011年

8 ;De-Novo Designed α-helix to Mimicking the OGT Binding with UDP-GlcNAc[A];第七届全国磷化学化工暨第四届海峡化学生物学、生物技术与医药发展讨论会论文集[C];2006年

9 李艳梅;陈永湘;;利用ESI-MS和MALDI-TOF鉴定多肽O-GlcNAc修饰位点[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年

10 邢立静;李娟;种康;;参与胞内运动的小麦凝集素VER2介导春化诱导的O-GlcNAc信号[A];中国植物学会七十五周年年会论文摘要汇编（1933-2008）[C];2008年

中国博士学位论文全文数据库 前6条

1 宓文义;O-GlcNAc糖基化修饰在肿瘤发生与转移过程中的作用及其机制研究[D];中国海洋大学;2011年

2 施建华;O-GlcNAc糖基化在神经疾病中的作用[D];苏州大学;2012年

3 顾玉超;O-GlcNAc修饰在乳腺癌转移过程中的作用及其机制研究[D];中国海洋大学;2008年

4 房俊强;大肠杆菌K12 GlcNAc-1-P尿苷转移酶的研究[D];山东大学;2009年

5 第五永长;银思维对拟SAD大鼠脑内tau磷酸化及其O-GlcNAc修饰的调节作用及相关研究[D];北京中医药大学;2011年

6 关婉怡;N-乙酰氨基葡萄糖/半乳糖核苷酸及类似物的酶法合成与应用研究[D];山东大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 丛琦;蛋白质O-GlcNAc修饰研究的方法探讨[D];中国海洋大学;2012年

2 高欢姿;基于糖链转移酶的N-糖链相对定量分析研究[D];延边大学;2015年

3 毛庆伏;O-GlcNAc糖基化修饰对TET3蛋白核定位的影响[D];西北农林科技大学;2015年

4 时照梅;蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰的规模化富集鉴定方法研究[D];安徽医科大学;2015年

5 张肖冰;蛋白质O-GlcNAc糖基化在紫杉醇抗肿瘤活性中的作用研究[D];山东大学;2015年

6 周丰;O-GlcNAc修饰对泛素化相关基因的调控[D];天津大学;2014年

7 姚丹;A20蛋白质O-GlcNAc修饰对大鼠主动脉平滑肌细胞炎症、反应应答的影响及机制[D];扬州大学;2015年

8 周洁雯;高效合成UDP-N-GlcNAc多酶体系的构建[D];浙江大学;2010年

9 邓瑞萍;基于人蛋白质组芯片的新O-GlcNAc糖基转移酶相互作用蛋白及底物发现研究[D];上海交通大学;2013年

10 樊琼;O-GlcNAc修饰在结肠癌形成和迁移过程中的作用[D];中国海洋大学;2011年

，

本文编号：994438