激活素A在大鼠PVN调控动脉血压作用及其机制研究

发布时间：2017-10-09 09:08

  本文关键词：激活素A在大鼠PVN调控动脉血压作用及其机制研究

  更多相关文章： 激活素A 下丘脑室旁核 自发性高血压 动脉血压

【摘要】：激活素A(Activin A)属于转化生长因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)超家族的多功能细胞因子,在多种组织器官的分化、发育以及细胞的增殖、凋亡调控中发挥重要作用。卵泡抑素(Follistatin,FS)是Activin的结合蛋白,能与Activin发生特异结合进而中和Activin的生物学效应。下丘脑室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)不仅可以调节自主神经功能,而且是神经内分泌活动的重要调节中枢,在血压中枢调节中发挥重要作用。但是,Activin A能否在中枢神经系统PVN调控动脉血压,仍无相关报道。因此,本研究利用Wistar-Kyoto(WKY)及自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rat,SHR),以及原代培养PVN神经元,应用RT-PCR、免疫组织化学染色、中枢核团微量注射和ELISA等实验方法,探讨Activin A在大鼠PVN调控动脉血压作用以及在高血压发病中的作用及其机制。本研究首先采用RT-PCR检测Activin A及其受体、信号传导蛋白Smads和FS在WKY和SHR大鼠PVN的表达,结果显示Activin A、Activin IIA型受体(activin type IIA receptor,Act RIIA)、IIB型受体(activin type IIB receptor,Act RIIB)、Smad2,3,4和FS m RNA在SHR大鼠PVN表达明显高于WKY大鼠,免疫组织化学染色进一步表明Activin A、Act R IIA及FS蛋白在SHR大鼠PVN表达也明显高于WKY大鼠,提示Activin A可能以自分泌/旁分泌的方式参与调节PVN神经元的功能,并且在WKY和SHR大鼠中存在表达量的差异。实验进一步采用大脑立体定位及中枢核团微量注射法检测了Activin A及FS在WKY及SHR大鼠PVN对动脉血压的作用,结果显示,PVN微量注射Activin A后,WKY及SHR大鼠动脉血压均明显升高,且SHR大鼠动脉血压升高比WKY大鼠更明显。实验同时检测了FS在WKY及SHR大鼠PVN对动脉血压的影响,结果显示PVN微量注射FS后对WKY大鼠动脉血压无明显作用,而SHR大鼠PVN微量注射FS可导致动脉血压明显下降。最后,实验利用神经元维持培养基体外原代培养WKY大鼠乳鼠PVN神经元,Activin A处理12h后,ELISA法检测PVN神经元培养上清中Ang II及AVP水平,RT-PCR方法检测PVN神经元Act R及Smads、FS、血管紧张素II 1型受体(angiotensin II type 1 receptor,AT1)、血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)、血管升压素(arginine vasopressin,AVP)及AVP受体(arginine vasopressin recptor,AVPR)m RNA表达。结果显示,Activin A可促进PVN神经元分泌Ang II及AVP,上调PVN神经元ACE、AT1及AVPR m RNA表达,同时也明显促进体外原代培养PVN神经元Act RIIA、Smad3及FS m RNA表达。上述研究结果表明,Activin A及其受体、Smads信号传导蛋白、FS在SHR大鼠PVN表达明显高于正常血压WKY大鼠,而且Activin A在PVN升高SHR大鼠动脉血压较WKY大鼠更明显,Activin结合蛋白FS能明显下调SHR大鼠动脉血压。因此,Activin A可能以自分泌/旁分泌形式调控PVN神经元功能,进而影响动脉血压,其作用与Act RIIA-Smad3信号传导通路有关。而且Activin A可能通过诱导PVN神经元Ang II及AVP的合成和释放,上调PVN神经元AT1及AVPR表达,参与SHR大鼠高血压的形成。因此,本研究不仅进一步揭示了Activin A在中枢神经系统PVN对动脉血压的调控作用,也为进一步阐述高血压发病机制及寻找有效的高血压中枢治疗靶点提供了研究基础。
【关键词】：激活素A 下丘脑室旁核 自发性高血压 动脉血压
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 英文词表11-12
• 第1章 文献综述12-20
• 1.1 激活素12-14
• 1.2 动脉血压调节14-17
• 1.2.1 肾素-血管紧张素系统14-15
• 1.2.2 压力感受性反射15
• 1.2.3 下丘脑室旁核15-16
• 1.2.4 精氨酸加压素16-17
• 1.3 激活素与高血压的关系17-18
• 1.4 本课题研究目的和特色18-20
• 1.4.1 本课题的研究目的18
• 1.4.2 研究内容18-19
• 1.4.3 本课题的研究特色19-20
• 第2章 材料与方法20-27
• 2.1 实验动物20
• 2.2 实验试剂20
• 2.3 相关实验试剂的配制20-21
• 2.3.1 1×PBS的配制20
• 2.3.2 胰蛋白酶消化液的配制20-21
• 2.3.3 4%多聚甲醛的配制21
• 2.4 实验仪器21-22
• 2.5 实验方法22-26
• 2.5.1 实验动物的饲养管理22
• 2.5.2 RT-PCR方法22-23
• 2.5.3 免疫组织化学染色23-25
• 2.5.4 PVN微量注射及大鼠动脉血压测定25
• 2.5.5 大鼠乳鼠PVN神经元培养25
• 2.5.6 ELISA方法25-26
• 2.6 统计学分析26-27
• 第3章 实验结果27-37
• 3.1 Activin A在WKY和SHR大鼠PVN的作用27-31
• 3.1.1 Activin A及其受体、Smads mRNA在WKY和SHR大鼠PVN的表达27-28
• 3.1.2 Activin A及ActRIIA蛋白在WKY和SHR大鼠PVN的表达28-29
• 3.1.3 Activin A在WKY和SHR大鼠PVN对动脉血压的作用29-31
• 3.2 FS在WKY和SHR大鼠PVN的作用31-33
• 3.2.1 FS mRNA在WKY和SHR大鼠PVN的表达31
• 3.2.2 FS蛋白在WKY和SHR大鼠PVN的表达31-32
• 3.2.3 FS在WKY和SHR大鼠PVN对动脉血压的作用32-33
• 3.3 Activin A对PVN神经元的作用机制研究33-37
• 3.3.1 ACE及AT1在WKY和SHR大鼠PVN组织中的表达33-34
• 3.3.2 Activin A对原代培养PVN神经元Ang II和AVP合成和分泌的作用34-35
• 3.3.3 Activin A对原代培养WKY大鼠PVN神经元Activin A受体和Smads信号传导分子的作用35-37
• 第4章 讨论37-41
• 4.1 Activin A在PVN调控动脉血压38-39
• 4.2 Activin A在PVN调控动脉血压的可能机制研究39-41
• 第5章 结论41-42
• 参考文献42-50
• 作者简介及攻读硕士期间取得的成果50-51
• 致谢51

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